[发明专利]一种评估公猪精子质量的方法

说明书

本公开提供了一种评估公猪精子质量的方法，具体步骤为：首先采集精液，然后将精液洗涤去除精浆，再离心得到精子，然后将精子稀释，最后分别对稀释的精子的外在指标和内在指标进行检测，所述内在指标的检测方法为FCM流式细胞术。所述方法分别对精子的外在指标和内在指标进行检测，解决了现有检测技术对检测猪精子质膜完整性、顶体膜完整性、线粒体活性、氧化力不足的问题，建立了一种全面评估猪精子质量的方法。

技术领域

本公开涉及医疗检测技术领域，具体涉及一种评估公猪精子质量的方法。

背景技术

公猪精子质量是影响母猪受胎率的主要因素，精子质量的检测是评估精液受精能力的基本手段，对于公畜精液在稀释、保存等处理过程中品质变化的监控及高繁殖力公畜的选育具有重要意义。目前应用于公畜精子质量检测的手段主要是精液常规分析(routinesperm analysis，RSA)和计算机辅助精液分析(computer-assisted sperm analysis，CASA)系统。RSA分析不育症组和正常生育组的精液分析结果具有广泛重叠，分析效率低，且易受检测者技术熟练程度和主观因素影响；CASA系统分析局限在精子密度、活力、畸形率和直线运动等外在动态参数，无法对精细胞的内在特性进行分析，因而无法获取较为全面的精子质量评估结果。

发明内容

本公开的目的是提供一种评估公猪精子质量的方法，以提高精子质量检测的全面性。

为实现上述目的，技术方案如下：

一种评估公猪精子质量的方法，其具体步骤包括：首先采集精液，然后将精液洗涤去除精浆，再离心得到精子，然后将精子稀释，最后分别对稀释的精子的外在指标和内在指标进行检测，所述内在指标的检测方法为FCM(Flow cytometry)流式细胞术。

所述精液洗涤是利用磷酸缓冲液或BWW培养液洗涤，所述离心为4℃850rpm/min离心5min，所述精子的稀释浓度为0.2-0.5亿/ml，所述精子的稀释液为葡萄糖-柠檬酸钠-卵黄液。

所述方法中的精子外在指标的检测是利用CASA系统进行检测。

所述方法中的精子外在指标分别为密度检测、活力检测和畸形率检测。

所述方法中的精子检测内在指标分别为：

(1)精细胞质膜的完整性检测；

(2)精细胞中线粒体的活性检测；

(3)精细胞的氧化力检测；

(4)精细胞顶体的完整性检测；

(5)细菌的浓度检测。

所述精细胞质膜完整性检测的步骤为：使用EASYKIT 1viability andconcentration荧光剂对精子进行标记，然后通过流式细胞仪进行检测。

所述精细胞中线粒体活性检测的步骤为：首先使用EASYKIT 2Mitochondrialactivity荧光剂对精细胞中的中端线粒体部位进行染色，然后通过流式细胞仪进行检测。

所述精细胞氧化力检测的步骤为：首先用0.8-5mmol/L H₂O₂处理精细胞，然后使用EASYKIT 3Oxidation molecule D荧光剂对处理后的精细胞进行标记，最后通过流式细胞仪进行检测。

所述精细胞顶体完整性检测的步骤为：使用EASYKIT 5viability和acrosomeintegrity两种荧光剂对精细胞顶体膜进行标记，然后通过流式细胞仪进行检测。

所述细菌浓度的检测的步骤为：首先过滤细菌，然后使用EASYKIT 6Bacterialconcentration荧光剂进行标记，最后通过流式细胞仪进行检测。