[发明专利]一种研究PGCs分化过程中Wnt信号与组蛋白联合作用于靶基因机制的方法

说明书

本发明提供一种研究PGCs分化过程中Wnt信号与组蛋白联合作用于靶基因机制的方法，涉及生物技术领域，所述方法通过体内外实验验证组蛋白是否具有调控Wnt信号通路的靶基因的作用、分析在ESCs、PGCs和SSCs三个过程组蛋白是否在靶基因的启动子区差异性富集、检测组蛋白甲基化/去甲基化是否影响靶基因对Wnt信号的响应、检测组蛋白去甲基化修饰酶对β‑Catenin与靶基因启动子结合位点的结合能力的影响；根据检测结果判断在PGCs分化过程中，Wnt信号联合组蛋白作用于靶基因的作用机制。利用本发明所述方法对PGCs形成过程中Wnt信号协同组蛋白作用于靶基因进行研究，有利于渗入了解PGCs形成的网络机制。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种研究PGCs分化过程中Wnt信号与组蛋白联合作用于靶基因机制的方法。

背景技术

众所周知，Wnt信号通路中β-Catenin和TCFs对靶基因转录的调控主要通过改变染色质状态来实现，而染色质是由细胞核中组蛋白与紧密缠绕其上的DNA组成的核小体经过多级压缩形成的。组蛋白和DNA的动态修饰(表观遗传修饰)影响了染色质的结构致密度，也影响了基因的转录状态，因此我们有理由相信WNT信号可能协同表观遗传因子调控靶基因的转录。但是目前并没有对Wnt信号通路与表观遗传因子是否协同调控靶基因转录的研究方法。

发明内容

本发明提供了一种对Wnt信号通路与表观遗传因子之间是否协同调控靶基因转录的研究方法，本发明所述方法将Wnt信号与表观遗传修饰联系在一起，为PGCs形成的网络调控机制研究提供了新的思路。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种研究PGCs分化过程中Wnt信号与组蛋白联合作用于靶基因机制的方法，包括以下步骤：

(1)通过体内和体外实验验证组蛋白是否具有调控Wnt信号通路的靶基因的作用；

(2)通过CHIP-seq分析在ESCs、PGCs和SSCs三个过程所述组蛋白是否在靶基因的启动子区差异性富集；

(3)检测所述组蛋白甲基化与去甲基化是否影响靶基因对Wnt信号通路的响应；

(4)检测所述组蛋白去甲基化修饰酶对β-Catenin与受组蛋白调控的Wnt信号的转录因子在靶基因启动子结合位点的结合能力的影响，以研究是否存在组蛋白去甲基化修饰酶与Wnt信号转录因子之间的竞争结合关系；

根据步骤(1)～(4)的结果判断在ESCs向PGCs分化过程中，Wnt信号通路联合所述组蛋白作用于靶基因的作用机制。

优选的，步骤(1)所述体外实验的方法，包括以下步骤：

A1、构建组蛋白甲基化酶慢病毒干扰载体和组蛋白去甲基化酶慢病毒干扰载体；

A2、将组蛋白甲基化酶慢病毒干扰载体和组蛋白去甲基化酶慢病毒干扰载体分别侵染ESCs，侵染48h后以BMP4诱导ESCs向PGCs分化，收集诱导2d、4d、6d后的细胞，检测收集的细胞中的基因表达情况。

优选的，步骤(1)所述体内实验的方法，包括以下步骤：

B1、构建组蛋白甲基化酶慢病毒干扰载体和组蛋白去甲基化酶慢病毒干扰载体；

B2、分别将组蛋白甲基化酶慢病毒干扰载体和组蛋白去甲基化酶慢病毒干扰载体转入至孵化48～58h的早期胚胎中，继续孵化4.5d后，测定胚胎的生殖组织中靶基因的表达变化。

优选的，若步骤(2)的结果为所述组蛋白在ESCs、PGCs和SSCs三个过程中能在靶基因的启动区差异性富集，则检测组蛋白甲基化以及去甲基化对靶基因启动子区的影响，其方法包括以下步骤：