[发明专利]用于梅毒病原体检测的液相杂交捕获文库及其构建方法

权利要求书

1.一种用于梅毒病原体检测的液相杂交捕获探针文库的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1：设计梅毒基因组序列和人基因组参照序列，所述梅毒基因组序列每隔10-20bp截取50-70bp，得到探针序列；将所得到探针序列与病原体数据库进行比对，选取其中特异比到梅毒上的序列作为液相杂交捕获文库的探针序列；所述基因组参照序列作为内参以保证液相杂交捕获效果，其选自人基因组保守序列；

步骤2：将所述设计梅毒基因组序列和人基因组参照序列在其上下游分别加入引物池合成通用引物序列，以便后续PCR扩增制备探针所需，所述引物池合成上游通用引物序列为SEQ No.1:TGTAATACGACTCACTATAGGGAGA；和所述引物池合成下游通用引物序列为SEQNo.2:TTCGTGGTCGCGTCTCA；所述引物池合成的序列结构是：TGTAATACGACTCACTATAGGGAGANNNNNTGAGACGCGACCACGAA，其中加粗的NNNNN代表多种插入片段序列，即梅毒基因组序列和/或人基因组参照序列截取得到的探针序列；

步骤3：利用所述上下游通用序列引物进行PCR扩增制备得到带有生物素标记的液相杂交捕获探针文库。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述梅毒基因组序列是GenBank号：CP003679.1的序列；和/或所述人基因组保守序列选取EFTUD2基因和/或SDHA基因部分序列作为人基因组参照序列；所述EFTUD2基因每隔10-20bp截取50-70bp，得到人基因组参照序列；所述SDHA基因每隔10-20bp截取50-70bp，得到人基因组参照序列。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，通过PCR扩增制备得到带有生物素标记的液相杂交捕获探针文库步骤的PCR的反应体系中，dUTP与dTTP的比例为1：3时。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，通过PCR扩增制备得到带有生物素标记的液相杂交捕获探针文库步骤中PCR扩增后经过二次磁珠纯化回收得到液相杂交捕获探针文库。

5.在权利要求1-4任一所述的构建方法中应用的梅毒病原体检测的液相杂交捕获探针文库。

6.根据权利要求5所述的液相杂交捕获探针文库，其特征在于，所述梅毒基因组序列是GenBank号：CP003679.1的序列。

7.根据权利要求5所述的液相杂交捕获探针文库，其特征在于，所述梅毒基因组序列每隔12bp截取65bp，得到探针序列；将所得到探针序列与病原体数据库进行比对，选取其中特异比到梅毒上的序列作为液相杂交捕获文库的探针序列。

8.根据权利要求5所述的液相杂交捕获探针文库，其特征在于，所述人基因组保守序列选取EFTUD2基因和/或SDHA基因部分序列作为人基因组参照序列；所述EFTUD2基因每隔10-20bp截取50-70bp，得到人基因组参照序列；所述SDHA基因每隔10-20bp截取50-70bp，得到人基因组参照序列。

9.根据权利要求8所述的液相杂交捕获探针文库，其特征在于，选取EFTUD2基因和/或SDHA基因部分序列作为人基因组参照序列，所述EFTUD2基因每隔16bp截取65bp，得到人基因组参照序列；和/或所述SDHA基因每隔16bp截取65bp，得到人基因组参照序列。