[发明专利]一种两地汤的HPLC特征图谱的检测方法有效

专利信息
申请号: 201910598333.1 申请日: 2019-07-03
公开(公告)号: CN110412155B 公开(公告)日: 2022-02-25
发明(设计)人: 孔令梅;刘海滨;张淹;周祥山;张路;李士栋;王春艳;齐晓丹 申请(专利权)人: 东阿阿胶股份有限公司
主分类号: G01N30/02 分类号: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/36
代理公司: 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 代理人: 胡剑辉
地址: 252299 山*** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 一种 两地 hplc 特征 图谱 检测 方法
【说明书】:

发明本发明公开了一种两地汤的HPLC特征图谱的检测方法,其特征在于包括以下步骤:(1)供试品溶液的制备:取待测两地汤制剂,制备供试品溶液;(2)对照品溶液的制备:取芍药苷和哈巴俄苷,配置对照品溶液;(3)对照特征图谱的制定:分别吸取供试品溶液和对照品溶液,注入高效液相色谱仪,依据N批以上供试品所测得的图谱,生成对照特征图谱,以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准,计算其他共有峰的相对保留时间。该方法精密度较高,稳定性、重复性良好,可以较为全面、有效的控制两地汤的质量。

技术领域

本发明属于药物质量控制技术领域,具体地说,本发明涉及两地汤的特征图谱的检测方法及应用。

背景技术

两地汤出自明末清初医家傅山(字青主)所著《傅青主女科》一书,其处方组成为酒地黄、玄参、酒白芍、麦冬、地骨皮、阿胶,临床应用广泛,是妇科调经常用效方。两地汤主要功效为滋阴清热,凉血调经,主治阴虚内热所致的月经先期,量少,经期延长及功能性子宫出血等症。

中药复方因原料组成较多,成份复杂,导致质量控制难度较大。特征图谱能较全面地反映复方成份类型及整体特征,表征中药内在质量,进而反映复方制剂的临床药效物质基础,为中药质量评价和控制提供了一条新思路。高效液相色谱法因具有灵敏度高、分析速度快、应用范围广等优点而成为中药特征图谱研究中应用最广泛的方法。

两地汤由六味中药组成,其中地黄中主要含有多糖类、环烯醚萜类及苯乙醇苷类等成分,玄参中主要含有环烯醚萜和苯丙素苷两类主要活性成分,白芍中主要活性成分为白芍总苷类,麦冬主要含有多糖类、甾体皂苷及高异黄酮类等成分,地骨皮含有生物碱类、有机酸类、肽类、蒽醌类,阿胶主要含有蛋白质和氨基酸类。由此可见,两地汤化学成分复杂,质量控制难度较大。截至目前,还没有关于两地汤质量检测和控制方法的文献报道,因此,建立两地汤质控方法既急迫又关键。

发明内容

本发明的目的在于提供两地汤的特征图谱的检测方法。

本发明的技术方案为:

一种两地汤的HPLC特征图谱的检测方法,包括以下步骤:

(1)供试品溶液的制备:取待测两地汤制剂,制备供试品溶液;

(2)对照品溶液的制备:取芍药苷和哈巴俄苷,配置对照品溶液;

(3)对照特征图谱的制定:分别吸取供试品溶液和对照品溶液,注入高效液相色谱仪,依据N批以上供试品所测得的图谱,生成对照特征图谱,以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准,计算其他共有峰的相对保留时间。

进一步的,所述的步骤(1)中,供试品溶液的制备方法为:精密称取待测两地汤制剂,加水溶解,加入4倍体积量乙腈,超声提取,过滤,滤液蒸干,残渣加低浓度甲醇溶解,用微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。

进一步的,所述的步骤(2)中,对照品溶液的制备方法为:取对照品加甲醇制成每1ml含芍药苷180μg、哈巴俄苷20μg的混合溶液,即得。

进一步的,所述的步骤(3)中,色谱条件为:色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充剂色谱柱;流动相A为甲醇;B为0.02%~0.5%的磷酸溶液;梯度洗脱;流速为0.6~1.4ml/min;检测波长为200~300nm;柱温20~50℃;理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

优选的,所述的步骤(3)中,所述高效液相色谱法的进样量为5-20μl;所述N为10-20;以参照物色谱峰保留时间为基准,计算其他共有色谱峰的相对保留时间,其相对保留时间不得超过规定值的±20%,优选为±5%;待测制剂的特征图谱与对照特征图谱的相似度,为0.9~1.0。

优选的,色谱柱优选为Thermo Hypersil GOLDTM aQ色谱柱,柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm;流动相B优选为0.05%的磷酸溶液;流速优选为1ml/min;检测波长优选为254nm;柱温优选为25℃。

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