[发明专利]咖啡愈伤组织的悬浮培养方法在审

申请号：	201910599053.2	申请日：	2019-07-04
公开（公告）号：	CN110169361A	公开（公告）日：	2019-08-27
发明（设计）人：	王晓阳;闫林;黄丽芳;孙权;龙宇宙;林兴军;孙燕;谭军;董云萍;吉训志	申请（专利权）人：	中国热带农业科学院香料饮料研究所
主分类号：	A01H4/00	分类号：	A01H4/00
代理公司：	北京集佳知识产权代理有限公司 11227	代理人：	王欢
地址：	571533 海***	国省代码：	海南;46
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摘要：
搜索关键词：	悬浮培养基悬浮培养愈伤组织咖啡悬浮新生细胞接种植物组织培养技术继代增殖培养胚性愈伤组织液体培养基活力保持悬浮细胞继代胚性
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【权利要求书】：

1.咖啡愈伤组织的悬浮培养方法，其特征在于，包括：

将咖啡胚性愈伤组织接种至悬浮培养基中进行悬浮起始培养；所述悬浮培养基由以下组分组成：50％MS大量元素、50％MS微量元素、50％MS铁盐、10mg/L半胱氨酸、5mg/L维生素B1、1mg/L尼克酰胺酸、1mg/L维生素B6、100mg/L肌醇、100mg/L酪蛋白、200mg/L麦芽提取物、1.5mg/L2,4-D、1.5mg/L KT、15mg/L蔗糖，PH值为5.6～5.8；

取所述悬浮起始培养后的新生细胞团，以0.03～0.04ml新生细胞团/1ml悬浮培养基的浓度接种至所述悬浮培养基中进行继代增殖培养。

2.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述咖啡包括小粒咖啡和中粒咖啡。

3.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述咖啡愈伤组织为由咖啡叶片诱导获得的愈伤组织。

4.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述咖啡愈伤组织为疏松易分离、富含细小球形胚的愈伤组织，所述咖啡愈伤组织的发育时间不超过4周。

5.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述悬浮培养基由以下组分组成：

50％MS大量元素、50％MS微量元素、50％MS铁盐、10mg/L半胱氨酸、5mg/L维生素B1、1mg/L尼克酰胺酸、1mg/L维生素B6、100mg/L肌醇、100mg/L酪蛋白、200mg/L麦芽提取物、1.5mg/L2,4-D、1.5mg/L KT、15mg/L蔗糖，PH值为5.6。

6.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述继代增殖培养的接种浓度为0.03ml悬浮细胞团/1ml悬浮培养基。

7.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述悬浮起始培养在27℃，转速100rpm，光照强度1500lux的间接光源下进行培养。

8.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述悬浮起始培养的时间为30d，培养期间，每15天换液一次。

9.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述新生细胞团的直径小于1mm。

10.根据权利要求1所述的悬浮培养方法，其特征在于，所述继代增殖培养的时间为90d，温度为27℃，光照强度1500lux。

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