[发明专利]一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法

权利要求书

1.一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，包括如下步骤：

（1）取鱼头部软组织，捣碎后作为试样加入提取液加热提取得粗提液；

（2）待粗提液冷却至室温，冷冻离心后取上清液用微孔滤膜过滤；

（3）用高效液相色谱测定滤液中的肌肽和鹅肌肽的含量，所述高效液相色谱的色谱柱中使用负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15作为填料；高效液相色谱测定时，使用紫外检测器检测。

2.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中所述负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15的制备方法如下：

A）将P123和NaF溶解在1-2mol/L的盐酸溶液中，35-45℃下搅拌至完全溶解；

B）向上述溶液中逐滴加入氰基乙基三乙氧基硅烷，搅拌20-30min后再逐滴加入正硅酸乙酯，35-45℃下搅拌6-8h；

C）向上述溶液中加入1-2mol/L的NaAlO₂的盐酸溶液，35-45℃下搅拌20-30h；

D）用氨水将溶液pH调节到1.6-1.7后，移入特氟龙内衬反应釜，并将反应釜置于100-200℃烘箱中活化36-48h；

E）将反应釜从烘箱中取出，降至室温后用氨水将溶液的pH调节至5.5-6.5，再置于100-200℃烘箱中活化36-48h；

F）过滤后将产物用蒸馏水和无水乙醇洗涤后，60-100℃下干燥8-12h，得到氰基化Al-SBA-15；

G）将氰基化Al-SBA-15加入到质量分数为44%-47%的硫酸溶液中，90-100℃下搅拌反应24-36h，过滤、洗涤后，70-90℃下干燥8-12h，得到羧基化Al-SBA-15；

H）将羧基化Al-SBA-15分散在0.1-0.2mol/L的CuSO₄溶液中，搅拌反应20-30h后抽滤，所得产物洗涤后在50-70℃下干燥8-10h；

I）将所得产物在马弗炉中500-600℃下焙烧4-5h，得到所述负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15。

3.根据权利要求2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤A）-步骤C）中，溶液中NaF、P123、氰基乙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯、NaAlO₂、HCl的质量比为1:（170-180）:（40-45）:（500-550）:（20-50）:（2600-2800）。

4.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（1）中所述提取液为蒸馏水、0.1mol/L NaOH溶液、0.6mol/L 盐酸中的一种。

5.根据权利要求1或4所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（1）中加入提取液中的试样质量为（0.8g-1.2g）/10mL。

6.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（1）中加热提取的温度为75-85℃，提取时间10-20min。

7.根据权利要求1所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（2）中冷冻离心时的温度为0-4℃，时间10-20min，微孔滤膜孔径为0.45μm。

8.根据权利要求1或2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中采用匀浆法将3.8-4g负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15填料装入250mm×4.6mm的不锈钢柱管中得到所述色谱柱，匀浆法中的溶液为体积比为90:10的正己烷-异丙醇，装柱压力为40-50MPa。

9.根据权利要求1或2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中高效液相色谱法测定时，以pH为8-9的20mmol/L磷酸盐缓冲液和甲醇为流动相，等梯度洗脱，其中甲醇的质量分数为1-5%。

10.根据权利要求1或2所述的测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，其特征是，步骤（3）中使用紫外检测器检测时，波长230nm，流速1.0mL/min，柱温35℃。