[发明专利]一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法

说明书

本发明涉及检测方法技术领域，公开了一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，包括如下步骤：取鱼头部软组织，捣碎后作为试样加入提取液加热提取得粗提液；待粗提液冷却至室温，冷冻离心后取上清液用微孔滤膜过滤；用高效液相色谱测定上述滤液中的肌肽和鹅肌肽的含量，所述高效液相色谱的色谱柱中使用负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15作为填料。本发明采用负载铜离子的介孔改性Al‑SBA‑15作为高效液相色谱分析时色谱柱中的填料，对肌肽和鹅肌肽的吸附和分离效果好，检测的精确度和灵敏度高，操作简便，无需繁琐的预处理步骤，仅通过简单的预处理即可上机测定同时峰面积和保留时间偏差很小，具有很高的准确性。

技术领域

本发明涉及检测方法技术领域，尤其是涉及一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法。

背景技术

肌肽和鹅肌肽是由L-组氨酸和β-丙氨酸合成的功能性二肽，存在于动物的骨骼肌及大脑中，通常从家禽骨骼肌中提取，具有维持机体pH值稳定、抗氧化、抗衰老和神经调节等重要生理作用。因此，建立快速、可靠的肌肽和鹅肌肽的检测方法十分必要。

目前肌肽和鹅肌肽的检测尚无相关国家标准，主要的测定方法有高效液相色谱法、离子交换色谱法和毛细管电泳法。但三种方法对样品的分离纯化要求都较高，需要复杂的前处理方法，测定生物体中肌肽和鹅肌肽含量时步骤繁琐、测量效率低。

为提高测量精度，简化前处理方法，目前一般使用高效液相色谱和质谱联用的方法对生物体内的肌肽和鹅肌肽进行测定，例如，文献：UHPLC-ESI-MS/MS法测定动物源食物提取物中肌肽与鹅肌肽的含量[J].分析测试学报,2018.中公开了一种超高效液相色谱－串联三重四极杆质谱法，以分子离子和碎片离子质荷比定性，建立了一种简单、快速、可同时测定肌肽和鹅肌肽含量的方法，以满足特医食品、保健食品等领域动物源提取物中肌肽和鹅肌肽含量的分析要求。

但使用昂贵复杂的质谱检测器检测成本较高，大部分实验室不具备检测条件，不利于检测方法的广泛使用。

发明内容

本发明是为了克服现有技术中使用高效液相色谱和质谱联用的方法测定生物体内的肌肽和鹅肌肽时，质谱检测器检测成本较高，大部分实验室不具备检测条件，不利于检测方法的广泛使用；如果仅采取高效液相色谱法测定，则精度较差，且对样品的分离纯化要求较高，需要复杂的前处理方法，测定步骤繁琐、测量效率低的问题，提供一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，测定时使用适合的填料及测定参数，使得只需对鱼头样品进行简单的预处理后，就可快速精确测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种测定鱼头中肌肽和鹅肌肽含量的高效液相色谱法，包括如下步骤：

(1)取鱼头部软组织，捣碎后作为试样加入提取液加热提取得粗提液；

(2)待粗提液冷却至室温，冷冻离心后取上清液用微孔滤膜过滤；

(3)用高效液相色谱测定上述滤液中的肌肽和鹅肌肽的含量，所述高效液相色谱的色谱柱中使用负载铜离子的介孔改性Al-SBA-15作为填料。

介孔SBA-15材料具有可调节的孔道结构、较大的孔径，较好的水热稳定性，并且易于官能团化，形成疏水或亲水环境，因此是色谱柱填料的理想原料。但SBA-15中仅存在的Si-OH键几乎不能与肌肽和鹅肌肽发生物理和化学吸附，因此单纯使用SBA-15作为填料无法很好的分离和测定肌肽和鹅肌肽的含量。