[发明专利]基于电化学传感器快速检测自由基的方法

权利要求书

1.基于电化学传感器快速检测自由基的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，制备羧基化g-C₃N₄纳米粒子，将三聚氰胺与NaCl和KCl研磨成粉末后煅烧4h，制得盐熔块；所述盐熔块经过研磨、去盐，离心以及透析后，将制得的溶液冻干备用；

步骤二，构建电化学传感器，将所述步骤一制备的羧基化g-C₃N₄纳米粒子和壳聚糖固定在玻碳电极上制得羧基化g-C₃N₄ NPs/CS电极，之后将ssDNA修饰在羧基化g-C₃N₄ NPs/CS电极上，制得ssDNA/ carboxylated-g-C₃N₄ NPs/CS电极；

步骤三，建立检测^•OH自由基的标准曲线，配制不同浓度的^•OH自由基溶液，其中将ssDNA/ carboxylated-g-C₃N₄ NPs/CS电极为工作电极，用亚甲基蓝作为信号分子；

步骤四，提取肉品中的^•OH自由基，利用ssDNA/ carboxylated-g-C₃N₄ NPs/CS电极对其进行检测；

所述步骤二中构建电化学传感器的具体步骤为：

1) 玻碳电极前处理；将玻碳电极依次用0.3µm和0.05 µm的氧化铝粉末抛光至镜面，然后用无水乙醇和超纯水依次超声30s，并在室温下用纯氮气吹干；

2）制备羧基化g-C₃N₄ NPs/CS电极；取3 mg/mL的羧基化g-C₃N₄纳米粒子溶液5 µL滴到电极上，室温下自然晾干后，滴加5 µL的1%壳聚糖溶液到电极上，室温下自然晾干，使羧基化g-C₃N₄ NPs固定在电极表面；

3）制备ssDNA/g-C₃N₄ NPs/CS电极；先用EDC/NHS溶液处理carboxylated-g-C₃N₄ NPs/CS电极，活化羧基，然后，将carboxylated-g-C₃N₄ NPs/CS电极用4 μM的 ssDNA溶液5 µL处理40 min后，用超纯水冲洗掉未结合的ssDNA，电极在室温下自然晾干后可得ssDNA/carboxylated-g-C₃N₄ NPs/CS电极；

所述步骤一中所述羧基化g-C₃N₄纳米粒子的制备步骤具体为：按比例称取三聚氰胺、NaCl和KCl混合研磨均匀后，将粉末置于马弗炉中670 °C 煅烧4h，升温速率为10 °C/min；冷却至室温后，可得亮黄色的盐熔块；之后将盐熔块研磨成均一的粉末，然后用稀盐酸除去产物中的盐，离心，将产物重新分散到超纯水中再次离心，除去大的氮化碳颗粒；收集上清液，用分子量为500的透析袋在超纯水中透析以除去残余的Na⁺， K⁺，Cl^-；最后，将透析后的溶液冻干，可得羧基化g-C₃N₄纳米粒子。

2.如权利要求1所述的基于电化学传感器快速检测自由基的方法，其特征在于，所述步骤三中所述自由基溶液的配制方法为：利用芬顿反应产生^•OH自由基，其中硫酸亚铁与过氧化氢的摩尔浓度比为1:6，pH为3.5；用新制的硫酸亚铁与新制的过氧化氢配置不同浓度的^•OH自由基溶液。

3.如权利要求1所述的基于电化学传感器快速检测自由基的方法，其特征在于，三聚氰胺、NaCl和KCl的比例为4:1:1.2-1.3。

4.如权利要求1所述的基于电化学传感器快速检测自由基的方法，其特征在于，所述步骤三和步骤四中，利用方波伏安法对不同浓度的^•OH自由基溶液和待检测溶液进行检测。