[发明专利]一种碱性蛋白酶的工业化液体发酵方法

权利要求书

1.一种碱性蛋白酶的工业化液体发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：①号种子培养：将产碱性蛋白酶的菌种接入1500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床220转/分，培养温度36-38℃，培养时间6-15h；

②号种子培养：将①号种子按照10％的接种量接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床220转/分，培养温度36-38℃，培养时间6-15h；培养条件与一级种子相同；

然后进行发酵培养。

2.根据权利要求1所述的碱性蛋白酶的工业化液体发酵方法，其特征在于：所述发酵所用培养基为：发酵培养基g/L：酵母浸粉15-20、棉籽饼粉25-35、麦芽糊精90-110、柠檬酸钠1-5、氯化钙2-5、K2HPO415-20、pH自然、溶剂为水；

发酵条件为：温度：30-40℃；转速：100～600r/min；通风量：1∶0.5～1∶2.5；溶氧维持在20～30％，发酵过程中自动流加氨水及20％(v/v)的盐酸，使发酵液pH值维持在7.0。

3.根据权利要求2所述的碱性蛋白酶的工业化液体发酵方法，其特征在于：所述发酵培养：将①号种子罐菌种以5-10％接种量接入发酵罐，培养温度32-36℃，搅拌速度200-700r/m，通风量V/V1:1-3,罐压0.05MPa,培养时间70-100h；

溶解氧控制：通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧15-30％；

pH值控制：通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值值保持在7.0-7.5；

补料控制：当发酵液中的还原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml时，开始添加补料培养基，补料量使发酵液还原糖含量维持为2mg/ml-5mg/ml。

4.根据权利要求3所述的碱性蛋白酶的工业化液体发酵方法，其特征在于：所述补料培养基组成为：麦芽糊精45％，豆饼水解液4.0％，不足部分纯净水补足，pH78.0，123℃灭菌40min。

5.根据权利要求1所述的碱性蛋白酶的工业化液体发酵方法，其特征在于：所述发酵罐培养基的调配方法为：按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调pH值为6.0，加入中温淀粉酶3u/g玉米粉与高温淀粉酶30u/g玉米粉，同时边搅拌边升温至70℃保温15-30min，然后缓慢升温至90℃保温15-30min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，调初始pH值为7.0-8.0，121-123℃灭菌30-40min备用。

6.根据权利要求5所述的碱性蛋白酶的工业化液体发酵方法，其特征在于：所述豆饼水解液的制备方法为：将豆饼与水按照质量比1:5-7均匀混合，然后加入豆饼质量5-7％的石灰，搅拌均匀，于120℃反应60-70min，降至室温，即得豆饼水解液。