[发明专利]一种具有肝细胞氧化损伤保护作用的天然寡肽有效
申请号: | 201910604780.3 | 申请日: | 2019-07-05 |
公开(公告)号: | CN110240630B | 公开(公告)日: | 2021-08-10 |
发明(设计)人: | 孙坤来;梁丽丽;王斌;陈荫;赵玉勤;蔡诗颖;初雪梅 | 申请(专利权)人: | 浙江海洋大学 |
主分类号: | C07K5/062 | 分类号: | C07K5/062;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/06;A61K38/05;A61P3/10;A61P9/00 |
代理公司: | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人: | 吴秉中 |
地址: | 316100 浙江省舟山市普陀区*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 具有 肝细胞 氧化 损伤 保护 作用 天然 寡肽 | ||
1.一种辣木籽寡肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
a、辣木籽蛋白质的提取;
b、辣木籽蛋白水解;
c、超滤;
d、阴离子交换色谱法;
e、凝胶过滤层析;
f、反相高效液相色谱法;
g、氨基酸序列及其分子质量的测定;
所述辣木籽寡肽的氨基酸序列为Ser-Phe,分子量为252.17Da;
所述步骤b采用风味蛋白酶进行酶解;
所述步骤a具体包括:首先将粉碎的辣木籽与乙酸乙酯混合2-3天;自然干燥后,与pH在87-8.9、浓度为1.5mol/L Tris-HCL按质量体积比为1:37-39的比例在41-43℃下混合,90-110min后离心取上清;加入4.2-4.3mol/L硫酸铵,24-26℃下沉淀蛋白质,蛋白质析出后用透析袋透析脱盐;
所述辣木籽与乙酸乙酯的质量体积比为1:5.5-6.5(g/mL);
所述风味蛋白酶用葡萄糖乙酸酯进行修饰;
所述风味蛋白酶用葡萄糖乙酸酯进行修饰的方法为:将含有风味蛋白酶的磷酸盐缓冲液中加入葡萄糖乙酸酯溶液,充分混合后,室温下放置18-24h,透析处理去除溶剂,冻干;
所述辣木籽寡肽的制备方法还包括对得到的辣木籽寡肽用柠檬酸锶进行处理,具体方法包括:按体积比1:3-4的比例,取3-4mg/mL柠檬酸锶和2-3mg/mL寡肽混合放入试管中,调节pH至7-8,反应体系总体积为10-15mL,将试管置于60-70℃下20-30min后,冰浴冷却,用截留分子量为300Da的超滤膜处理,收集滤液,冻干。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤b至步骤f所得物质均进行冻干处理。
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