[发明专利]一种具有肝细胞氧化损伤保护作用的天然寡肽

说明书

本发明提供一种具有肝细胞氧化损伤保护作用的天然寡肽，属于辣木籽深加工领域，该寡肽分离自辣木籽蛋白水解物，氨基酸序列为Ser‑Phe，分子量为252.17Da。该寡肽的制备方法包括辣木籽蛋白质的提取，用风味蛋白酶对辣木籽蛋白水解，超滤，阴离子交换色谱法，凝胶过滤层析，反相高效液相色谱法，氨基酸序列及其分子质量的测定。还公开了该寡肽在研究治疗糖尿病、心脏病药物中的用途。本发明提供的寡肽具有较高的肝细胞氧化损伤保护作用，提供的制备方法获得目的肽的得率较高。

技术领域

本发明属于辣木籽深加工领域，具体涉及一种具有肝细胞氧化损伤保护作用的天然寡肽。

背景技术

活性氧(ROS)包括羟基自由基、超氧阴离子自由基、单线态氧和过氧化氢，是人类细胞正常代谢的副产物，在细胞信号转导和增殖中发挥重要作用。过量的ROS会导致氧化和抗氧化作用失衡，超过细胞在体内的有效抗氧化反应能力时，会在体内引发氧化应激反应。氧化应激可引起蛋白质交联、脂质过氧化、DNA和RNA损伤等氧化损伤，进而导致糖尿病、心血管疾病、类风湿关节炎、癌症、帕金森病等一系列疾病。为了减少或抑制自由基的产生，常见的人工抗氧化剂叔丁基对苯二酚、二叔丁基对甲酚和丁茴香醚已经广泛应用于食品保鲜，但其肝损伤和致癌性的缺陷对人类健康造成潜在的巨大的威胁，从而限制了他们的使用范围和用量。因此，寻找天然、高效、无毒的抗氧化剂作为合成抗氧化剂的替代品，一直是人们的主要兴趣。近年来，抗氧化肽因其来源广泛、抗氧化活性强而受到广泛关注。辣木属辣木科多年生木本植物，原产于热带或南亚热带干旱或半干旱地区。一系列研究发现，辣木叶、种子和根的提取物对人类有很多好处，如抗糖尿病和保护肝脏，抗尿石性能，以及改善肝纤维化。我们之前的研究表明，FM3(辣木籽蛋白水解物的分子量小于3.5kDa)能有效地清除DPPH·(EC50 4.0mg/mL)，HO·(EC50 4.2mg/mL)，O2^-·(EC50 4.3mg/mL)和ABTS·⁺(EC505.3mg/mL)。

现有技术如授权公告号为CN 103275180 B的中国发明专利，公开了一种马面鲀鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途，该抗氧化肽的氨基酸序列为Leu-Ser-His-Gly-Pro-Tyr(LSHGPY)，ESI-MS定分子量为672Da。该发明制备工艺科学合理，酶解过程易监控，制得的抗氧化肽具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、保健食品和食品添加剂等应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有肝细胞氧化损伤保护作用的天然寡肽，该寡肽分子量小，容易穿过屏障，靠近缺电子基团，肽序列中的芳香族氨基酸残基Phe的芳环可以促进对氧化金属离子的螯合作用，抗氧化活性强；能够掩盖Akt磷酸化位点Ser473，抑制Akt的活性，激活FOXO3a的转录活性，从而促进谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px和超氧化物歧化酶SOD的表达。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种辣木籽寡肽，其氨基酸序列为Ser-Phe，分子量为252.17Da。肽的抗氧化活性与其氨基酸的组成及排列顺序、疏水性、空间体积大小及酸碱性等有关。辣木籽蛋白含有较丰富的具有供质子或供电子能力的氨基酸，包括Tyr、Met、Cys，较丰富的疏水性氨基酸包括Leu、Pro、Phe、Val以及丰富的酸性氨基酸Glu。因此，对辣木籽蛋白进行水解可以制备得到具有强抗氧化活性的辣木籽肽。一般来说，低分子量、疏水性和芳香氨基酸的多肽具有较高的抗氧化活性。含2-10个氨基酸的短肽具有较强的自由基清除活性，能有效抑制脂质过氧化，可以穿过膜屏蔽并在组织水平上发挥多种生物活性，分子质量越小越容易穿过屏障，靠近缺电子基团，增强肽的活性；较大分子质量的多肽与自由基反应时存在空间位阻，导致多肽的抗氧化活性下降。肽序列中芳香族氨基酸残基Phe的芳环可以促进对氧化金属离子的螯合作用，对该寡肽的抗氧化活性的贡献较大。

作为优选，辣木籽寡肽具有肝细胞氧化损伤保护作用。