[发明专利]一种用于肿瘤细胞的靶向多功能纳米粒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于肿瘤细胞的靶向多功能纳米粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将分子量为7000-12000的聚乳酸-羟基乙酸共聚物和酞菁铁溶于三氯甲烷中，然后加入内水相，冰浴条件下超声乳化处理，再加入聚乙烯醇水溶液，再次超声乳化处理后加入异丙醇水溶液，获得混合液Ⅰ，搅拌所述混合液Ⅰ4-6h后去除所述三氯甲烷，最后离心获得沉淀Ⅰ，将所述沉淀Ⅰ以去离子水洗涤后再以去离子水重悬获得重悬液Ⅰ，将所述重悬液Ⅰ放置于0-4℃下，备用；所述混合液Ⅰ中聚乳酸-羟基乙酸共聚物、酞菁铁、内水相、聚乙烯醇和异丙醇的质量体积比为50:4-8:0.2-0.4:320-400:0.16-0.2，所述质量体积比的单位为mg:mg:mL:mg:mL；

(2)将N-羟基硫代琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶于浓度为0.1M，pH＝5的MES缓冲液中，然后加入步骤(1)中获得的重悬液Ⅰ中，获得混合液Ⅱ，搅拌所述混合液Ⅱ2-3h后离心获得沉淀Ⅱ，将所述沉淀Ⅱ以浓度为0.1M，pH＝8的MES缓冲液洗涤后再以浓度为0.1M，pH＝8的MES缓冲液重悬获得重悬液Ⅱ；所述N-羟基硫代琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与步骤(1)中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为13-20:40-60:1；

(3)将适配体经离心处理后获得的固体溶于浓度为0.1M，pH值为8的TE缓冲液中，然后加入步骤(2)中获得的重悬液Ⅱ中获得混合液Ⅲ，搅拌所述混合液Ⅲ2-3h后用双蒸水稀释，接着离心获得沉淀Ⅲ，将所述沉淀Ⅲ以浓度为0.1M，pH值为8的TE缓冲液洗涤后冷冻干燥，即可；所述适配体与步骤(1)中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为2-4:50。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述内水相为水、化疗药物的水溶液或相变材料中的一种。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述水为双蒸水；所述化疗药物的水溶液为盐酸多柔比星水溶液或硫酸长春新碱水溶液中的一种；所述相变材料为全氟正戊烷或全氟己烷中的一种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，第一次超声乳化处理的条件为：超声功率为100w，超声频率为20kHz，每间隔5s超声一次，每次超声时间为5s，共超声25-30次；第二次超声乳化处理的条件为：超声功率为100w，超声频率为20kHz，每间隔5s超声一次，每次超声时间为5s，共超声45-50次。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以10-30r/min的速度搅拌所述混合液Ⅰ；步骤(2)中，以100-200r/min的速度搅拌所述混合液Ⅱ；步骤(3)中，以100-200r/min的速度搅拌所述混合液Ⅲ。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中，均以10000-11000r/min的速度离心5-8min后分别获得沉淀Ⅰ、沉淀Ⅱ和沉淀Ⅲ。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中，所述沉淀Ⅰ、沉淀Ⅱ和沉淀Ⅲ每次洗涤完后均以10000-11000r/min的速度离心5-8min。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述适配体以3000-5000r/min的速度离心30-60s后获得固体，按质量体积比3-4:0.08将所述固体溶于浓度为0.1M，pH值为8的TE缓冲液中，所述质量体积比的单位为mg:mL。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述适配体为分子量为8000-9000的AS1411。

10.由权利要求1-9任一项所述的方法制备的用于肿瘤细胞的靶向多功能纳米粒。