[发明专利]AKR1B10化学发光定量检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种抗人肿瘤特异性标志物醛酮还原酶1B10（Aldo-Keto Reductase 1B10，AKR1B10）蛋白的化学发光定量检测试剂盒，主要用于癌症的筛查、诊断、疗效判断、预后评估或复发监测，所述试剂盒主要包括AKR1B10校准品、AKR1B10质控品、链霉亲和素磁珠溶液、生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体、激发液1和2；所述激发液1，是将0.05M HNO₃和0.65%H₂O₂充分溶解于纯化水中，调整pH值为1.21；激发液2，是将0.25M NaOH充分溶解于纯化水中，调整pH值为13.31。

2.根据权利要求1中所述的试剂盒，其特征在于：所述生物素标记抗体是将鼠抗AKR1B10单克隆抗体与生物素藕联制备而成，缓冲液为1x PBS，pH值为7.2，内含0.1%的吐温20（v/v）、1%的牛血清白蛋白（w/v）、0.5%的Proclin300（v/v），所述吖啶酯标记抗体是将兔抗AKR1B10多克隆抗体与吖啶酯藕联制备而成，缓冲液为1x PBS，pH值为7.2，内含0.1%的吐温20（v/v）、1%的牛血清白蛋白（w/v）、0.5%的Proclin300（v/v）。

3.根据权利要求1中所述的试剂盒，其特征在于：所述的AKR1B10校准品，其工作浓度分别为0、375、750、1500、3000、6000pg/mL，缓冲液为1x PBS，pH值为7.2，内含0.1%的吐温20（v/v）、1%的牛血清白蛋白（w/v）、0.5%的Proclin300（v/v）；

所述的AKR1B10质控品，其工作浓度分别为1000 pg/mL、5000pg/mL，缓冲液为1x PBS，pH值为7.2，内含0.1%的吐温20（v/v）、1%的牛血清白蛋白（w/v）、0.5%的Proclin300（v/v）；

所述链霉亲和素磁珠溶液，是将链霉亲和素磁珠溶于1x PBS，pH值为7.2，内含0.1%的吐温20（v/v）、1%的牛血清白蛋白（w/v）、0.5%的Proclin300（v/v）。

4.根据权利要求1至3任一项所述的试剂盒在血清、尿液、乳汁、肠液、大便或组织样本中的AKR1B10蛋白检测中的应用。

5.一种抗人肿瘤特异性标志物醛酮还原酶1B10（Aldo-Keto Reductase 1B10，AKR1B10）蛋白的化学发光定量检测方法，其特征在于：所述方法是利用权利要求1所述的试剂盒采用双抗体夹心免疫检测法：待测血清中的AKR1B10蛋白与生物素标记抗体和吖啶酯标记抗体结合，再与链霉亲和素磁珠结合，加入激发液1和2，检测其发光值，通过标准曲线计算得出样品中AKR1B10的浓度。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征于所述方法具体步骤如下：

（1）在不同反应管中分别加入10ul血清样本和AKR1B10校准品，分别再加入100ul生物素标记抗体和100ul吖啶酯标记抗体，37℃振荡反应15分钟；

（2）各管中分别加入50ul链霉亲和素磁珠溶液，37℃振荡反应15分钟；

（3）使用磁分离，每管加入300ul清洗液，将反应管中试剂反复洗涤3次 ；

（4）各管中分别加入100ul激发液1和激发液2，用化学发光仪器检测发光强度；

（5）数据分析：

通过四参数线性拟合校准品的浓度值和发光值获得标准曲线，计算各受试者血清样本中AKR1B10蛋白的含量，结果用Graphpad 4.0统计学软件进行分析。

7.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征于所述方法主要用于癌症的筛查、诊断、疗效判断、预后评估或复发监测。

8.权利要求1所述的试剂盒或权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述癌症为肝癌、乳腺癌或肺癌。