[发明专利]一种miRNAs原料液的提取方法

说明书

本发明公开了一种miRNAs原料液的提取方法，所述方法包括：S101：选取颜色都为黄色的金银花，并保证金银花的颜色均匀，然后使用分选机筛选出质量均匀的金银花，然后使用电子秤称取400g筛选出的金银花，然后将称取的400g金银花均等的分成两份，并将两份金银花分别标记为A、B；本发明通过科学合理的提取方法，可实现大规模工业化生产；并且使用金银花作为提取的原材料，提取过程所涉及的物质无毒害，具有食用安全，环保保护的特点；提取过程使用的仪器都可循环利用，极大的降低植物提取miRNAs成本；同时该提取方法操作简单，方便了工作人员使用。

技术领域

本发明涉及miRNAs原料液提取技术领域，具体为一种miRNAs原料液的提取方法。

背景技术

miRNAs是真核生物中广泛存在的一种长约21到23个核苷酸的RNA分子，可调节其他基因的表达；miRNA来自一些从DNA转录而来，但无法进一步转译成蛋白质的RNA（属于非编码RNA）；miRNA通过与靶信使核糖核酸(mRNA)特异结合，从而抑制转录后基因表达，在调控基因表达、细胞周期、生物体发育时序等方面起重要作用；在动物中，一个微RNA通常可以调控数十个基因。

现有的植物miRNAs提取方法以柱提法、磁珠法、trizol法、异硫氰酸胍法和SDS-KAc法为主；现有提取技术存在四个问题：1、多为小量样本提取；2、提取过程中涉及有毒、有害物质；3、提取成本高；4、提取难度大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种miRNAs原料液的提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种miRNAs原料液的提取方法，所述方法包括：

S101：选取颜色都为黄色的金银花，并保证金银花的颜色均匀，然后使用分选机筛选出质量均匀的金银花，然后使用电子秤称取400g筛选出的金银花，然后将称取的400g金银花均等的分成两份，并将两份金银花分别标记为A、B；

S102：将A份金银花与B份金银花分别放入到两个相同的金银花清洗机内，使用金银花清洗机去除A份金银花与B份金银花表面的杂质与残留农药，对A份金银花与B份金银花起到清洗、浸泡、杀菌消毒和固色的作用，然后将清洗后的A份金银花与B份金银花分别放在两个相同的烧杯内，并将A份金银花对应的烧杯标记为C，B份金银花对应的烧杯标记为D；

S103：将C烧杯内的A份金银花加入到中药粉碎机内，通过中药粉碎机将A份金银花粉碎，并将A份金银花的细胞壁击破，同时将D烧杯内的B份金银花放置在阴凉处以备后续使用；

S104：将中药粉碎机粉碎后的A份金银花倒入到反应釜内，并向反应釜内加入500ML的纯净水，然后将反应釜内部的温度调节至30℃～120℃，通过反应釜震荡搅拌5min-300min，使粉碎后的A份金银花内部的miRNAs从细胞释放出来，并进入到纯净水中，从而达到浸提的效果，从而制备出miRNAs初始原料液；

S105：然后将反应釜内部的miRNAs初始原料液倒出，并使其降温至常温状态，然后使用粗过滤筛将miRNAs初始原料液中的杂质过滤出，然后使用细胞过滤筛将miRNAs初始原料液中的细碎杂质过滤出，从而得到最终的miRNAs原料液；

S106：使用定量RT-PCR方法对过滤后的miRNAs原料液进行检测，如果检测到miRNAs原料液中的miRNAs比重较小时，使用D烧杯内的B份金银花重复S104、S105步骤，从新制备新的miRNAs原料液。

其中，所述分选机利用空气悬浮原理选取出重量相近的金银花。

其中，所述中药粉碎机用于粉碎A份金银花的时间为20s～600s，所述中药粉碎机用于粉碎B份金银花的时间为20s～600s。

其中，所述中药粉碎机粉碎后的A份金银花和B份金银花粒径为25～800目。