[发明专利]一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法在审
申请号: | 201910607957.5 | 申请日: | 2019-07-08 |
公开(公告)号: | CN110186918A | 公开(公告)日: | 2019-08-30 |
发明(设计)人: | 肖强;周秀梅;王楠;吴秋花 | 申请(专利权)人: | 湖北民族大学 |
主分类号: | G01N21/78 | 分类号: | G01N21/78;G01N1/28 |
代理公司: | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人: | 陈炳萍 |
地址: | 445000 湖北省恩*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 属植物 过氧化物酶 叶片 樟科 快速鉴定 显色 单向电泳 电泳技术 技术检测 快速分离 快速扫描 联苯胺法 自来水洗 超纯水 扫描仪 透射稿 漂洗 染色 沥干 凝胶 备用 采摘 分类 新鲜 申请 | ||
1.一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将新鲜采摘的润楠属植物叶片,用自来水洗净后,再用超纯水漂洗2-3次;将叶片上水沥干;
(2)取步骤(1)中润楠属植物叶片,提取润楠属植物叶片中的过氧化物酶备用;
(3)取步骤(2)中的过氧化物酶采用单向电泳快速分离润楠属植物叶过氧化物酶;
(4)将步骤(3)中提取的过氧化物酶采用联苯胺法快速显色,显色完成后,在扫描仪中的透射稿模式快速扫描染色后的凝胶。
2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法,其特征在于,步骤(2)中提取润楠属植物叶片中的过氧化物酶的方法采用冰浴研磨法。
3.根据权利要求2所述的一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法,其特征在于,冰浴研磨法包括以下步骤:先将植物叶片剪碎,在天平上称重,叶鲜重:提取液体积按1:8比例加入50mmol/L、pH为7.8的PBS样品提取液,冰浴研磨,在4℃条件下,12000rpm离心20min,所得上清液按照体积比为1:1加入质量分数为40%蔗糖,所得溶液按照8:1加入0.5%的溴酚蓝,贮存4℃冰箱备用。
4.根据权利要求3所述的一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法,其特征在于,单向电泳快速分离法包括以下步骤:(1)采用垂直电泳槽进行试验,利用循环水浴系统冷却电泳仪进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳,制好模具后,将在4℃冰箱冷却的试剂调配成分离胶浓度为7.5%,pH为8.8的丙烯酰胺分离胶灌注至梳子下端2.5cm处,用超纯水或者异丙醇液封,凝胶半小时以上;
(2)弃去分离胶上的超纯水或异丙醇,4℃冰箱冷却的试剂调配成浓度为5%、pH为6.8的丙烯酰胺浓缩胶,插入长城齿梳子,凝胶半小时以上;
(3)用甘氨酸电极缓冲液在180V(10V/cm)恒压电泳40min,前沿指示剂到达分离胶后变换电压为310V,恒压电泳7h后,停止电泳。
5.根据权利要求4所述的一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法,其特征在于,甘氨酸电极缓冲液含1.44%甘氨酸和0.3%Tris。
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