[发明专利]一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法

说明书

本发明申请属于电泳技术领域，具体公开了一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法，包括以下步骤：(1)将新鲜采摘的润楠属植物叶片，用自来水洗净后，再用超纯水漂洗2‑3次；将叶片上水沥干；(2)取步骤(1)中润楠属植物叶片，提取润楠属植物叶片中的过氧化物酶备用；(3)取步骤(2)中的过氧化物酶采用单向电泳快速分离润楠属植物叶过氧化物酶；(4)将步骤(3)中分离的过氧化物酶采用联苯胺法快速显色，显色完成后，在扫描仪中的透射稿模式快速扫描染色后的凝胶。本发明主要用于鉴定樟科润楠属植物，解决了现有技术检测润楠属植物的分类周期性长、可行性差以致对鉴定造成不便的问题。

技术领域

本发明属于电泳技术领域，具体公开了一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：樟科润楠属是我国樟科中种类较多、分布较广的属之一，其树种多为常绿乔木或灌木，多集中分布于长江以南各省(区)，常与樟科其他树种混生。全世界润楠属总共约100多种，主要分布于东南亚和东亚，我国特有的润楠属植物有82种，占全球同属种数的60％以上。润楠属植物是我国南方主要的经济林木，在园林应用、木材、香料等方面占有重要地位，同时具有一定的药用价值，润楠属植物的广泛用途对于快速鉴别该属不同种植物提出了更高要求。

对于润楠属植物分类和鉴定研究中，通常以植物学形状特征和生化技术作为鉴定方法，但在实际应用中，润楠属各品种间植物学特征相似的情况很多，且此方法需要的周期长，对研究者的专业背景要求高，可行性不强。而利用与遗传相关的生理生化物质(如过氧化物酶、DNA等)进行品种鉴定是较为简单、准确、快速的方法，但其难点是对于相关物质的提取和高效分离。这样导致对润楠属植物的分类周期性长，可行性差，对鉴定造成不便。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法，以解决现有技术检测润楠属植物的分类周期性长、可行性差以致对鉴定造成不便的问题。

为了达到上述目的，本发明的技术方案为：一种快速鉴定樟科润楠属植物的方法，包括以下步骤：

(1)将新鲜采摘的润楠属植物叶片，用自来水洗净后，再用超纯水漂洗2-3次；将叶片上水沥干；

(2)取步骤(1)中润楠属植物叶片，提取润楠属植物叶片中的过氧化物酶备用；

(3)取步骤(2)中的过氧化物酶采用单向电泳快速分离润楠属植物叶过氧化物酶；

(4)将步骤(3)中提取的过氧化物酶采用联苯胺法快速显色，显色完成后，在扫描仪中的透射稿模式快速扫描染色后的凝胶。

进一步，步骤(2)中提取润楠属植物叶片中的过氧化物酶的方法采用冰浴研磨法。

进一步，冰浴研磨法包括以下步骤：先将植物叶片剪碎，在天平上称重，叶鲜重：提取液体积按1:8比例加入50mmol/L、pH为7.8的PBS样品提取液，冰浴研磨，在4℃条件下，12000rpm离心20min，所得上清液按照体积比为1：1加入质量分数为40％蔗糖，所得溶液按照8:1加入0.5％的溴酚蓝，贮存4℃冰箱备用。

进一步，单向快速分离法包括以下步骤：(1)采用垂直电泳槽进行试验，利用循环水浴系统冷却电泳仪进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳，制好模具后，将在4℃冰箱冷却的试剂调配成分离胶浓度为7.5％，pH为8.8的丙烯酰胺分离胶灌注至梳子下端2.5cm处，用超纯水或者异丙醇液封，凝胶半小时以上；

(2)弃去分离胶上的超纯水或异丙醇，4℃冰箱冷却的试剂调配成浓度为5％、pH为6.8的丙烯酰胺浓缩胶，插入长城齿梳子，凝胶半小时以上；

(3)用甘氨酸电极缓冲液在180V(10V/cm)恒压电泳40min，前沿指示剂到达分离胶后变换电压为310V，恒压电泳7h后，停止电泳。

进一步，甘氨酸电极缓冲液含1.44％甘氨酸和0.3％Tris。