[发明专利]一种检测熊胆粉中兽药残留的方法

权利要求书

1.一种检测熊胆粉中兽药残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，对照品储备溶液的制备：精密称取各对照品适量，根据溶解性，加适宜溶剂制成每1ml含100μg的溶液，即得100μg/ml的对照品储备溶液；

S2，混合对照品溶液的制备：精密量取对照品储备溶液适量，用15％乙腈制成每ml含1μg的溶液，即得1μg/ml的混合对照品溶液；

S3，基质混合对照品溶液的制备：取空白熊胆粉样品适量，研细，混匀，取约0.1g，精密称定，置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，精密加入混合对照品溶液100μl，同供试品溶液的制备方法处理，即得；

S4，供试品溶液的制备：取熊胆粉样品适量，研细，混匀，取约0.1g，精密称定，置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加0.1mol/L Na2EDTA-McIlvaine缓冲液并且缓冲液(pH4.0)10ml，摇匀，涡旋使充分浸润；精密加入5％冰醋酸乙腈10ml，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈震荡10分钟；以一定的比例加入无水氯化钠:硫酸钠混合粉末5g，再置振荡器上剧烈振荡3分钟，离心5分钟，使分层；吸取上清液6ml，置已预先装有净化材料的分散固相萃取净化管中，涡旋使充分混匀，再置振荡器上剧烈振荡5分钟使净化完全，离心5分钟，精密吸取上清液2ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至干，精密加0.2ml15％乙腈，涡旋1分钟，超声1分钟，混匀，离心，取上清液，即得；

S5，测定法：分别精密吸取上述基质混合对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入液相色谱-质谱仪，测定。

2.根据权利要求1所述的一种检测熊胆粉中兽药残留的方法，其特征在于，所述S5，液相色谱包括流动相、洗脱方式以及选择仪器，所述S5，液相色谱中的流动相是以下(1)至(4)中的任意一种：

(1)流动相A0.1％甲酸(含0.2mmol/L甲酸铵和0.2mmol氟化铵)溶液-流动相B0.1％甲酸乙腈溶液；

(2)流动相A0.2％甲酸(含0.3mmol/L甲酸铵和0.3mmol氟化铵)溶液-流动相B0.1％甲酸乙腈溶液；

(3)流动相A0.2％甲酸(含0.5mmol/L甲酸铵和0.5mmol氟化铵)溶液-流动相B0.2％甲酸乙腈溶液；

(4)流动相A0.1％甲酸(含0.4mmol/L甲酸铵和0.4mmol氟化铵)溶液-流动相B0.2％甲酸乙腈溶液。

所述S5，液相色谱中洗脱方式采用梯度洗脱，梯度洗脱的流程是以下(1)至(3)中的任意一种：

(1)0～1.5min，体积百分浓度1％流动相B，1.5～2.0min，体积百分浓度1-10％流动相B，2.0～4.5min，体积百分浓度10-18％流动相B，4.5～6min，体积百分浓度18％–22％流动相B，6～9min，体积百分浓度22-30％流动相B，9～12min，体积百分浓度30-35％流动相B；12～20min，体积百分浓度35-80％流动相B，20～26min，体积百分浓度80-100％流动相B；

(2)0～0.5min，体积百分浓度2％流动相B，0.5～1.8min，体积百分浓度2-15％流动相B，1.8～3.5min，体积百分浓度10-15％流动相B，3.5～6min，体积百分浓度15％–25％流动相B，6～7min，体积百分浓度25-30％流动相B，7～11min，体积百分浓度30-35％流动相B；11～16min，体积百分浓度35-100％流动相B，16～26min，体积百分浓度100％流动相B；

(3)0～1.0min，体积百分浓度3％流动相B，0.5～1.8min，体积百分浓度2-15％流动相B，1.8～5min，体积百分浓度10-15％流动相B，5～10min，体积百分浓度15％–20％流动相B，10～15min，体积百分浓度20-30％流动相B，15～20min，体积百分浓度30-35％流动相B；20～30min，体积百分浓度35-100％流动相B，30～35min，体积百分浓度100％流动相B。

所述S5，质谱条件中，仪器采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI)模式下多反应监测(MRM)。