[发明专利]一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法

说明书

本发明涉及化学领域，尤其为一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法，包括如下步骤：S1，制备对照品溶液；S2，制备供试品溶液；S3，高效液相色谱质谱联用仪检测；S4，定性检测；S5，定量检测：按上述方法，于高效液相色谱质谱联用仪设定的条件下分别进样测定，重复6次，测定其对应浓度的峰面积，进行线性回归，得到回归方程，从而得到相关系数和线性范围，确定痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量。本发明中的方法可对痰热清注射液和熊胆粉提取物的熊去氧胆酸、3α‑羟基‑7‑氧代‑5β‑胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α‑羟基‑3‑氧代‑5β‑胆烷酸4种成分进行定性分析，该方法操作简便、结果稳定、重现性好、精密度高。

技术领域

本发明属于化学领域，涉及一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法。

背景技术

痰热清注射液由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘五味药材经提取、精制而成，具有清热、解毒、化痰等功效，在治疗上呼吸道感染，急性支气管炎，肺炎，肺结核并发肺部感染，肺癌晚期合并肺部感染，重症哮喘合并感染等方面疗效显著。

其中的原料熊胆粉提取物现行企业标准中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量测定采用高效液相蒸发光散射检测器，原色谱图中出现平头峰，重现性较差、精密度较低，因此需要一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法对上述问题做出改善。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量的测定方法，包括如下步骤：

S1，制备对照品溶液：取熊去氧胆酸对照品、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸对照品、鹅去氧胆酸对照品和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成混合溶液，摇匀，即得；

S2，制备供试品溶液：提供不同批次的熊胆粉提取物，加甲醇稀释，摇匀，即得；

S3，高效液相色谱质谱联用仪检测：分别精密吸取供试品和对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录55分钟内的图谱，并设定好图谱测定的色谱条件：色谱柱、柱温、紫外检测波长、流速和进样量，质谱条件：采集模式和扫描范围，离子源参数：离子源温度、毛细管电压、鞘气、辅助气和分辨率；

S4，定性检测：按上述方法，以精确分子量检索，并经HPLC比对保留时间，确认熊胆粉提取物和痰热清注射液中含有熊去氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、鹅去氧胆酸和7α-羟基-3-氧代-5β -胆烷酸4种成分；

S5，定量检测：按上述方法，于高效液相色谱质谱联用仪设定的条件下分别进样测定，重复6次，测定其对应浓度的峰面积，进行线性回归，得到回归方程，从而得到相关系数和线性范围，确定痰热清注射液中四种熊胆粉相关成分含量。

优选的，所述S1，混合溶液每1ml中成分为：熊去氧胆酸5.0-9.0mg、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸0.01-0.05mg、鹅去氧胆酸0.5-1.5mg和7α-羟基-3-氧代-5β-胆烷酸0.5-1.5mg。

优选的，所述S3，图谱测定的色谱条件为：色谱柱Pheomenex Luna C18、柱温为25-35℃、紫外检测波长为200-300nm、流速0.8-1.2ml/min和进样量为1-3μl，质谱条件：采集模式：负模式和扫描范围m/z：70～1050，离子源参数：离子源温度300-350℃、毛细管电压3000-3500V、鞘气为25-50arb、辅助气为5-15arb和分辨率70000。

优选的，所述S3，图谱测定的色谱条件中流动相是以下S1至S4中的任意一种：

S1，流动相A乙腈-流动相B体积百分浓度0.1％甲酸水溶液；