[发明专利]一种蒙桑多倍体种苗的培养方法

权利要求书

1.一种蒙桑多倍体种苗的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从蒙桑组培苗上截取茎段，接种于预培养培养基中进行预培养，得到预培养茎段；

从蒙桑组培苗上截取茎段的步骤包括：选取生长健壮的蒙桑组培苗，将其剪去叶片及叶柄后得到茎段，将茎段截为1～1.5cm长的小段，每小段留有1个腋芽，从小段一端进行纵切，得到长度为1mm的切口；

所述预培养培养基以MS为基础培养基，并添加KT、6-BA、NAA、PVP和活性炭得到，所述预培养培养基中KT的浓度为2.0mg/L，6-BA的浓度为0.5mg/L，NAA的浓度为0.5mg/L，PVP的浓度为0.5g/L，活性炭的浓度为1.0g/L；

所述预培养条件为：从蒙桑组培苗上截取茎段接种于预培养培养基中，在温度为25±2℃，每天光照时间为8h，光照强度为2500lx ，黑暗时间为16h的条件下培养72h以上；

(2)将所述预培养茎段接种于含有秋水仙素的诱导培养基中进行诱导培养，得到诱导后的茎段；

所述诱导培养基以不添加琼脂的MS为基础培养基，并添加KT、6-BA、NAA、PVP、秋水仙素和活性炭得到，所述诱导培养基中KT的浓度为2.0mg/L，6-BA的浓度为0.5mg/L，NAA的浓度为0.5mg/L，PVP的浓度为0.5g/L，秋水仙素的浓度为30mg/L，活性炭的浓度为1.0g/L；

所述诱导培养条件为：将所述预培养茎段接种于诱导培养基中，在温度为20±2℃，每天光照时间为8h，光照强度为2500lx ，黑暗时间为16h的条件下培养72h以上；

(3)将所述诱导后的茎段接种于增殖培养基中进行增殖培养，得到丛生芽；

所述增殖培养基与预培养培养基的组成相同；

(4)将所述丛生芽接种于生根培养基中进行生根培养，得到生根苗；

所述生根培养基以MS为基础培养基，并添加IBA得到，所述生根培养基中IBA的浓度为0.3mg/L。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，将从蒙桑组培苗上截取的茎段横向插入培养基内，仅上表面露出培养基，然后进行预培养。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(3)中，所述增殖培养条件为：将所述诱导后的茎段接种于增殖培养基中，在温度为25±2℃，每天光照时间为8h，光照强度为2500lx ，黑暗时间为16h的条件下培养20～30天，至诱导苗生长至30cm以上。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(3)结束后，对所述丛生芽的叶片进行染色体数目分析，分析仪器为流式细胞仪，确定其染色体数目，筛选出四倍体继续培养20～30d后，进行生根培养。

5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(4)中，所述生根培养条件为：将所述丛生芽接种于生根培养基中，在温度为25±2℃，每天光照时间为8h，光照强度为2500lx ，黑暗时间为16h的条件下培养15～25天。

6.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(4)结束后，还包括步骤(5)：将所述生根苗洗净后，在基质中培养40～60d得到移栽苗。

7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，所述基质中草炭、蛭石、珍珠岩的体积比为3：3：2。