[发明专利]一种蒙桑多倍体种苗的培养方法

说明书

本发明提供了一种蒙桑多倍体种苗的培养方法，该方法包括对蒙桑组培苗选取茎段后进行预培养，然后对开始产生愈伤组织的茎段采用秋水仙素诱导得到多倍体，经过增殖培养和生根培养得到蒙桑的多倍体幼苗。该方法能够克服蒙桑组织培养褐化现象严重、多倍体诱导率低、诱导后嵌合体较多的问题。

技术领域

本发明涉及林木繁育技术领域，具体涉及一种蒙桑多倍体种苗的培养方法。

背景技术

蒙桑(Morus mongolica)，别名岩桑，是理想的生态经济型树种，对北方地区的水土保持及生态修复可以起到十分积极的作用。主要分布在大青山山地、阴山南部黄土丘陵区、大兴安岭南部山地，以及科左后旗大青沟自然保护区。

目前，国内对蒙桑的研究较少。刘玲等(2016)对其地理分布及来源进行了研究，认为蒙桑在第四纪冰期前即存在，在适应环境的过程中形成特定的特征，对寒冷具有较强的适应性。对于桑的组织培养及多倍体种质资源创制研究相对较多，但存在苗木组织培养易产生褐化现象，增殖系数较低，生长较慢、多倍体诱导率相对较低，易产生嵌合体等现象。高丽霞等(2013)对桂桑优62、粤桑11号和沙2×伦109材料的种子及实生苗采用秋水仙素诱导，成功获得四倍体，诱导率可达33.3％。李晓双等(2017)对长穗桑用秋水仙素进行诱导，最终仅获得3株多倍体材料。王茜龄(2009)采用不同诱导方法对桑树的不定芽进行诱导，仅适用滴液法获得四倍体材料两份，使用浸渍法仅获得2份嵌合体材料。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明以植物离体组织培养方法为基础，经茎段愈伤组织诱导，采用秋水仙素浸渍法处理，以获得蒙桑多倍体材料。该方法成功解决了组织培养过程中严重的褐化现象，提高了多倍体的诱导率，减少了嵌合体的形成，节省了试验成本。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明涉及一种蒙桑多倍体种苗的培养方法，包括以下步骤：

(1)从蒙桑组培苗上截取茎段，接种于预培养培养基中进行预培养，得到预培养茎段；

(2)将所述预培养茎段接种于含有秋水仙素的诱导培养基中进行诱导培养，得到诱导后的茎段；

(3)将所述诱导后的茎段接种于增殖培养基中进行增殖培养，得到丛生芽；

(4)将所述丛生芽接种于生根培养基中进行生根培养，得到生根苗。

优选地，步骤(1)中，从蒙桑组培苗上截取茎段的步骤包括：选取生长健壮的蒙桑组培苗，将其剪去叶片及叶柄后得到茎段，将茎段截为1～1.5cm长的小段，每小段留有1个腋芽，从小段一端进行纵切，得到长度为1mm的切口。

优选地，步骤(1)中，将从蒙桑组培苗上截取的茎段横向插入培养基内，仅上表面露出培养基，然后进行预培养。

优选地，步骤(1)中，所述预培养培养基以MS为基础培养基，并添加KT、6-BA、NAA、PVP和活性炭得到，所述预培养培养基中KT的浓度为2.0mg/L，6-BA的浓度为0.5mg/L，NAA的浓度为0.5mg/L，PVP的浓度为0.5g/L，活性炭的浓度为1.0g/L。

优选地，步骤(1)中，所述预培养条件为：从蒙桑组培苗上截取茎段接种于预培养培养基中，在温度为25±2℃，每天光照时间为8h，光照强度为2500xl，黑暗时间为16h的条件下培养72h以上。

优选地，步骤(2)中，所述诱导培养基以不添加琼脂的MS为基础培养基，并添加KT、6-BA、NAA、PVP、秋水仙素和活性炭得到，所述诱导培养基中KT的浓度为2.0mg/L，6-BA的浓度为0.5mg/L，NAA的浓度为0.5mg/L，PVP的浓度为0.5g/L，秋水仙素的浓度为30mg/L，活性炭的浓度为1.0g/L。