[发明专利]一种用于转基因茄子的再生培养基及其应用

权利要求书

1.一种用于转基因茄子的再生培养基，其特征在于，包括如下组分：0.1～0.5μg/mL噻苯隆、15～20mM NH₄NO₃、12～16mM KNO₃、2～2.5mM CaCl₂·2H₂O、1～1.2mM MgSO₄·7H₂O、0.8～1.0mM KH₂PO₄、3～4μM KI、0.05～0.08mMH₃BO₃、0.05～0.08mM MnSO₄·4H₂O、20～25μMZnSO₄·7H₂O、0.5～0.8μM Na₂MoO₄·2H₂O、0.05～0.08μM CuSO₄·5H₂O、0.05～0.08μMCoCl₂·6H₂O、0.05～0.08mM EDTA，pH5.7～5.9。

2.根据权利要求1所述一种用于转基因茄子的再生培养基，其特征在于，还包括10～15μg/mLN⁶-[异戊烯]-腺嘌呤。

3.根据权利要求1或2所述一种用于转基因茄子的再生培养基，其特征在于，还包括120～150mg/L肌醇、1.0～1.5mg/L烟酸、1.0～1.5mg/L盐酸吡哆醇、0.2～0.5mg/L盐酸硫胺素。

4.根据权利要求3所述一种用于转基因茄子的再生培养基，其特征在于，还包括20～50g/L蔗糖和5～8g/L琼脂。

5.权利要求1-4任一所述一种用于转基因茄子的再生培养基在获得茄子转基因植株中的应用，其特征在于，具体应用方法如下：

步骤一、采摘自然成熟的茄子果实，取出未成熟胚待用；

步骤二、农杆菌活化：将含有目的基因的农杆菌接种于含有卡那霉素的YEB固体培养基上，一定温度下进行暗培养至长出农杆菌单菌落，挑单菌落接种于含有卡那霉素的YEB液体培养基中，一定温度下进行振荡培养，将振荡培养所得菌液转入离心管中，4000r/min离心，收集菌体后用等体积的无菌水悬浮菌液，得到农杆菌菌悬液待用；

步骤三、农杆菌侵染：将步骤一备好的未成熟胚浸入步骤二备好的农杆菌菌悬液中，浸没10分钟完成农杆菌的侵染；

步骤四、未成熟胚的接种：将步骤三经农杆菌侵染过的未成熟胚置于再生培养基上，27℃黑暗条件下培养至长出外植体后，用无菌水冲洗外植体，并将外植体转移至选择培养基上黑暗培养一定时间；

步骤五、外植体的培养：将步骤四经过黑暗培养的选择培养基置于光照条件下继续培养一定时间，获得健壮分化苗。

6.根据权利要求5所述一种用于转基因茄子的再生培养基在获得茄子转基因植株中的应用，其特征在于，步骤二所述暗培养的温度为27℃，培养时间为48h；所述振荡培养的温度为27℃，振荡培养转速为220r/min。

7.根据权利要求5或6所述一种用于转基因茄子的再生培养基在获得茄子转基因植株中的应用，其特征在于，步骤二所述振荡培养后所得培养液中农杆菌的OD₆₀₀值为0.4～0.6。