[发明专利]一种修饰的K562细胞、其制备方法及NK细胞培养组合物有效
| 申请号： | 201910620164.7 | 申请日： | 2016-05-20 |
| 公开（公告）号： | CN110358736B | 公开（公告）日： | 2023-07-07 |
| 发明（设计）人： | 卓朗;王晖;王柯 | 申请（专利权）人： | 杭州朔溪生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/0783;C12N15/85;C12N13/00 |
| 代理公司： | 北京天昊联合知识产权代理有限公司 11112 | 代理人： | 樊晓焕;张苏娜 |
| 地址： | 311231 浙江省杭州市萧*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 修饰 k562 细胞 制备 方法 nk 细胞培养 组合 | ||
1.一种修饰的K562细胞，其特征在于，所述修饰的K562细胞是通过将融合基因通过质粒进行基因重组至K562细胞的AAVS1转座子而得到的；其中，所述融合基因为人源基因mbIL15、4-1BBL和mbIL21。
2.如权利要求1所述的修饰的K562细胞，其特征在于，所述质粒的骨架为pFastBac1。
3.如权利要求2所述的修饰的K562细胞，其特征在于，所述质粒的骨架的启动子为巨细胞病毒启动子。
4.如权利要求1所述的修饰的K562细胞，其特征在于，所述基因重组使用锌指核酸酶ZFN介导的同源重组技术。
5.一种NK细胞培养组合物，其特征在于，该NK细胞培养组合物包含如权利要求1-4任一项所述的修饰的K562细胞、IL-2和无血清干细胞生长培养基。
6.如权利要求5所述的NK细胞培养组合物，其特征在于，该NK细胞培养组合物还包括FBS。
7.一种制备如权利要求1-4任一项所述的修饰的K562细胞的方法，包括：
构建pFastBac-融合基因；其中，所述融合基因为人源基因mbIL15、4-1BBL和mbIL21；
将K562细胞进行悬浮处理；
将pFastBac-ZFN和所述pFastBac-融合基因电转至所述K562细胞；
将经电转的所述K562细胞转移到K562生长培养基中进行培养；
培养后，进行单细胞克隆扩增、对单细胞克隆进行PCR基因分型、流式细胞术分析，制得稳定表达所述融合基因的所述修饰的K562细胞。
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