[发明专利]一种干细胞皮肤粘贴片及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种干细胞皮肤粘贴片及其制备方法和应用。本发明通过采用自体正常皮肤组织(极少量)用于分离皮肤干细胞(包括表皮干细胞或和真皮干细胞)或其它组织分离间充质干细胞包括脂肪干细胞，进行体外培养后即可获得干细胞皮肤粘贴片，以降低因异体皮基质引起的免疫排斥反应，从而降低干细胞粘贴的抗原性，提高皮肤修复效率，并有再生功能性皮肤的潜力。同时本发明制备方法简单，无需复杂昂贵设备，具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于生物组织工程技术领域，具体涉及一种干细胞皮肤粘贴片及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

皮肤是人体与外界环境接触的屏障，不仅起保护、分泌、代谢和感觉等作用，而且参与免疫反应和维持机体内环境的稳定。作为人体最表露的皮肤，各种重症皮肤破溃性疾病及烧伤、烫伤等是日常生活中的常见伤害。皮肤受到大面积严重损伤后，早期可呈溃疡状，又常继发于慢性溃疡或慢性窦道开口，或瘢痕部的溃疡经久不愈造成局部扩散和远地转移，当侵及真皮层时，还可能造成经久不愈；即使愈合也会留下瘢痕挛缩，造成功能障碍；如果处理不当，还会引起感染甚至威胁生命，因此必须进行尽早积极治疗。

目前，临床上所用创面敷料大致分为三类：天然材料类、动物组织衍生物制品和合成高分子材料类，然而发明人发现，上述创面敷料普遍存在不同程度的来源不足或者容易发生自体免疫排斥反应等缺点，同时也无法实现皮肤的功能修复(如无疤痕修复)。同时，近年来，组织工程化人工皮肤的研究越来越多，然而从目前研究来看，其采用异体皮肤时，同样面临免疫排斥问题，而且更为重要的是，其也无法解决皮肤的功能修复问题，同时制备过程繁琐复杂，制备成本较高。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种干细胞粘贴及其制备方法和应用。本发明通过采用自体正常皮肤组织(极少量)用于分离皮肤干细胞(包括表皮干细胞或和真皮干细胞)或其它组织分离间充质干细胞包括脂肪干细胞，进行体外培养后即可获得干细胞皮肤粘贴片，以降低因异体皮基质引起的免疫排斥反应，从而降低干细胞粘贴的抗原性，提高皮肤修复效率，并有再生功能性皮肤的潜力，因此具有良好的实际应用之价值。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的第一个方面，提供一种干细胞皮肤粘贴片的制备方法，所述制备方法包括：

S1、从皮肤组织块上分离获取皮肤干细胞；

S2、皮肤干细胞的培养传代扩增；

S3、将传代扩增获得皮肤干细胞铺设于细胞膜片上孵育获得细胞粘贴片。

进一步的，所述步骤S1具体方法为：

取新鲜皮肤组织块，依次用75％乙醇、3％双抗的PBS浸洗；然后将组织切碎，加入消化酶混合液孵育酶解得酶解液I，然后再加入0.25％胰酶继续孵育酶解得酶解液II，之后加入DNaseⅠ继续孵育得酶解液III；终止消化后，获得单细胞悬液，过滤细胞悬液，取滤过的细胞，用带血清的DMEM重悬洗涤一次，然后用皮肤干细胞培养基重悬；

所述皮肤组织块可选自患者自体；

进一步的，所述步骤S2具体方法为：

将分离获得的皮肤干细胞进行细胞培养，细胞长满后采用胰酶消化，并以1:3-10倍进行传代培养，传代后细胞长满后继续使用胰酶消化细胞；

细胞培养具体条件为：在37℃，5％CO₂条件下培养。

进一步的，所述步骤S3具体方法为：

将传代2～4代的皮肤干细胞使用胰酶消化并计数，将皮肤干细胞重悬后铺设于细胞膜片上，并进行孵育即得。