[发明专利]一种用于肝癌早期筛查和诊断的联合检测血清标志物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种用于肝癌早期筛查和诊断的联合检测血清标志物、包含该联合检测血清标志物的试剂盒以及检测方法，属于生物医学技术领域。本发明基于癌症驱动基因在肿瘤发生和发展中所起的作用，定制138个癌症驱动基因编码的人类蛋白质芯片，通过蛋白质芯片初步筛选出肝癌的早期检测血清标志物，再经过ELISA实验进行验证，最终筛选出可用于肝癌早期筛查和诊断的一组肝癌联合检测血清标志物，其包括PTEN、PTCH1、IDH1、SRSF2、MSH2和NPM1共6种基因编码的蛋白，可辅助肝癌的临床诊断，具有灵敏度高、特异性强、成本低等优点。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于肝癌早期筛查和诊断的联合检测血清标志物、包含该联合检测血清标志物的试剂盒以及检测方法。

背景技术

原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人们的生命健康。肝癌起病隐匿，预后差。手术切除和肝移植等方式被认为是肝癌根治性治疗的手段，但大多数患者在初次诊断时，便已进入肝癌晚期，因而失去了治疗的机会，其中最主要的原因是早期肝癌患者通常无明显症状，或者体积很小，影像学检查较难察觉，而甲胎蛋白(AFP)作为主要的血清标记物，又存在敏感性低的缺点，已不再作为肝癌的筛查指标。公布号CN105092842A的中国发明专利公开了一种用于诊断肝癌的联合型代谢标志物，包括色氨酸、谷氨酰胺和2-羟基丁酸，通过检测来自受试者的血清样品中上述联合标志物各自的相对浓度，基于二元逻辑回归方程计算联合标志物变量P，再基于确定的截点值判断受试者是否患有肝癌，该标志物可应用于辅助肝癌的临床诊断，与传统的临床诊断标志物甲胎蛋白(AFP)相互补充可以早期判别肝癌，但其应用有一定的局限性。因此国内外研究者们在肝癌肿瘤标志物层面进行了大量研究，致力于为肝癌的分子诊断以及术后个体化治疗方案的制定等提供重要的理论依据。

近年来，在人类肿瘤学的研究领域内，许多研究已经发现癌症患者血清中含有一组独特的诱发自身抗体反应的细胞蛋白，被称为肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen，TAA)，其诱导产生的抗体称为抗TAA-抗体(autoantibody)。其中肿瘤相关抗原p62能够激发人体产生免疫反应，产生自身抗体，具有重要意义的是抗p62自身抗体在肝癌患者循环系统出现的时间：使用从慢性肝炎发展到肝硬化再到肝癌的序列血清，发现抗p62自身抗体在患者的慢性肝炎阶段没有出现，在肝硬化的前期、中期也没有出现，而在肝硬化阶段的晚期肝癌发生前的一段时间含量急剧升高，而此时尚未出现肝癌的临床症状和体征，临床上尚不能发现肝癌，并且这一现象在多个肝癌患者的序列血清中得到重复。这就说明，抗p62自身抗体是一个有潜力的能够早期诊断肝癌的血清学标志物。随后对小样本的肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者和正常人的血清检测抗p62自身抗体进行检测，结果显示这种自身抗体的特异度很高，但是灵敏度尚不能达到20％。显然，如果单独以抗p62自身抗体作为诊断肝癌的标志物，诊断价值较低。研究者在接下来的工作中，试图寻找更加灵敏和特异的抗TAA自身抗体，可是结果不够理想。在2003年的一项使用7种抗TAA自身抗体检测肝癌的研究中，单个指标的灵敏度不超过20％，但是通过并联这7种TAA自身抗体，检测的灵敏度可以达到56.9％，而诊断的特异度仍然很高。说明联合多个TAA自身抗体具有较高的诊断价值，是一种有应用潜力的策略。