[发明专利]猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测引物组及试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测猪肉中猪囊尾蚴、旋毛虫、刚地弓形虫、欧猥裂头蚴的多重PCR检测引物组，其特征在于，所述引物组包括如下四对引物：

旋毛虫检测引物：

Ts-F：5’-GTT CCA TGT GAA CAG CAG T-3’，

Ts-R:5’-CGA AAA CAT ACG ACA ACT GC-3’；

刚地弓形虫检测引物：

Tg-F:5’-GAT TTG CAT TCA AGA AGC TGA TAG TAT-3’，

Tg-R:5’-AGT TAG GAA GCA ATC TGA AAG CAC ATC-3’；

猪囊尾蚴检测引物：

Cc-F:5’-TCT GCT TGC GTA TTG GAT AA-3’，

Cc-R:5’-TGT ACA ATC ATC CAC CCA AC-3’；

欧猥裂头蚴检测引物：

Sm-F:5’-ACT TGA TCA TTT AGA GGA AGT-3’，

Sm-R:5’-CTC CGC TTA GTG ATA TGC T-3’。

2.一种权利要求1所述的多重PCR检测引物组在制备检测猪肉中食源性寄生虫的试剂盒中的用途，其特征在于，所述食源性寄生虫包括旋毛虫、刚地弓形虫、猪囊尾蚴和欧猥裂头蚴。

3.一种同时检测猪肉中猪囊尾蚴、旋毛虫、刚地弓形虫、欧猥裂头蚴的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的多重PCR检测引物组。

4.如权利要求3所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括混装在一起的所述四对引物，四对引物的摩尔比为Ts:Tg:Cc:Sm＝1:1:1:1。

5.如权利要求3所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括独立包装的所述四对引物。

6.如权利要求3所述的多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：含Mg²⁺的10×PCR反应缓冲液、每种浓度为2.5mM的dNTP、每种浓度为10μM的上游引物、每种浓度为10μM的下游引物、4种阳性对照DNA和超纯水。

7.一种用于非诊断目的的猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、提取待测样品的总DNA；

S2、采用权利要求2所述试剂盒中的四对引物，以所述总DNA为模板进行多重PCR反应，获得扩增后的物料；

S3、琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，若扩增后的物料中含120bp的扩增产物，则样品中含有旋毛虫；若扩增后的物料中含333bp的扩增产物，则样品中含有刚地弓形虫；若扩增后的物料中含523bp的扩增产物，则样品中含有猪囊尾蚴；若扩增后的物料中含1300bp的扩增产物，则样品中含有欧猥裂头蚴。

8.如权利要求7所述的猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR反应中，所述四对引物在PCR反应体系中的终浓度分别为Ts-F/R 0.5～10μM，Tg-F/R0.5～10μM，Cc-F/R 0.5～10μM，Sm-F/R 0.5～10μM。

9.如权利要求7所述的猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR反应条件为：95℃变性5min；然后95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；再72℃延伸7min。

10.如权利要求7所述的猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测方法，其特征在于，所述多重PCR反应采用25μL反应体系，其中含Mg²⁺的10×PCR反应缓冲液2.5μL，每种浓度为2.5mM的dNTP 2μL，浓度为8000U/mL的Ex Taq酶0.5μL，每种浓度为10μM的上游引物组1μL，每种浓度为10μM的下游引物组1μL，模板DNA 2μL，超纯水16μL。