[发明专利]猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测引物组及试剂盒

说明书

本发明公开了一种猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测引物组及试剂盒；包括如SEQ ID NO.1/2所示的旋毛虫检测引物；如SEQ ID NO.3/4所示的刚地弓形虫检测引物；如SEQ ID NO.5/6所示的猪囊尾蚴检测引物；如SEQ ID NO.7/8所示的欧猥裂头蚴检测引物。本发明建立了能同时检测猪肉中猪囊尾蚴、旋毛虫、刚地弓形虫、欧猥裂头蚴的多重PCR引物组、包括该引物组的多重PCR检测试剂盒以及利用该引物组的多重PCR检测方法，极大地提高了分子检测的工作效率，而且方法的敏感性高、特异性强，适合于屠宰场、养殖场及出入境检验检疫机构等使用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种猪肉中食源性寄生虫的多重PCR检测引物组及试剂盒。

背景技术

猪肉是我国居民最喜欢的肉类食品，但我国生猪产品的质量和安全离人民群众的期望仍有较大差距，食品安全事故频发，其中，食源性寄生虫是引发动物食品安全事件最主要的因素。寄生于猪肉中的食源性寄生虫主要包括猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫——猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)、旋毛虫(Trichinella spiralis)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、曼氏迭宫绦虫(Spirometra mansoni)的幼虫欧猥裂头蚴(Spirometra erinaceieuropaei plerocercoid larvae)4种。

猪囊尾蚴寄生于猪的横纹肌，以及脑、心脏、皮下、眼、淋巴结、肺等组织和器官，人吃生的或含未杀死囊尾蚴的猪肉，以及被猪带绦虫虫卵污染的食物时造成感染。当寄生于人的脑部，其致残、致死率相当高，轻者引起头痛、头晕、恶心、呕吐，重者神经系统受损，癫痫频繁发作，颅内压升高，造成痴呆、失明等严重后遗症，甚至危及生命；如寄生于眼部，可引起视力下降甚至失明；寄生于肌肉，引起局部肌肉疼痛。由于寄生部位特殊，治愈非常困难。猪自身感染猪囊尾蚴后，亦可造成巨大的经济损失。2004年，全国第二次人体重要寄生虫病现状调查(简称“第二次全国寄生虫调查”)结果显示，我国共有29个省(区、市)存在其成虫带绦虫的流行，约55万人感染，感染率0.28％，较1988-1992年第一次调查上升52.5％，其中西藏、四川分别上升97.0％和98.0％。

猪的旋毛虫感染遍布我国26个省(区、市)，部分地区感染率高达10％～34.2％，对养猪业危害巨大，被农业部列为二类动物疾病。人通过生食或半生食含虫的肉类(主要是猪肉)而感染，其成虫寄生于肠黏膜上皮细胞，新生幼虫经血液循环移行后分布全身各处，尤其是骨骼肌细胞，且可长期寄生，终生带虫。感染初期，患者出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻、乏力、发热畏寒症状；感染中期，表现常年肌肉酸痛和无力，持续性高热、头痛、头晕、水肿、皮肤瘙痒等症状，严重者丧失劳动能力；后期持续肌肉疼痛、消瘦乏力、严重衰竭，重度感染者可造成严重的心肌炎、心力衰竭、肺水肿、尿毒症及大脑损伤，导致死亡。全球约有1 100万人感染。我国居民血清阳性率为3.38％；至少有15个省(区、市)的121个县市报道存在病例；1964-2011年共暴发600余起，感染38 797例，死亡336例，95％因摄入携带旋毛虫的猪肉引起；隐性感染由1995年的200万人上升至4 000万人。

刚地弓形虫可感染包括人在内的200余种脊椎动物，我国猪的感染率为4.78％～85.7％，但多为隐性感染，缺乏明显的临床症状。人食用生的、未煮熟的猪肉可造成感染，对孕妇及免疫功能不全者的危害严重，常引起流产、死胎或早产，并可传给胎儿，导致智力发育缺陷、视力障碍、脑膜炎等急慢性疾病。国外人群平均感染率在0.6％～94.0％，约有10-20亿人感染，欧美地区较高，英、法、美国的感染率分别为20％～40％、80％～90％、50％～60％。我国居民感染率在0.1％-47.3％，第二次全国寄生虫调查显示，我国居民血清阳性率为7.97％，比第一次调查时上升45.2％，其中动物饲养员等特殊人群的阳性率高达9.83％，全国约6 000万人感染。目前刚地弓形虫病尚缺乏非常有效的治疗药物。