[发明专利]一种利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法

权利要求书

1.一种利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，包括以下步骤：

采集待测固体沉积物，预处理后以溶剂稀释获得不同浓度的实验样品，以稀释所用的溶剂为空白样品；

将发光细菌菌液加入到各实验样品和空白样品中，暴露15～20min后以滤膜过滤获取滤液，取相同体积的滤液置于水质快速毒性检测仪中，5min后测定发光细菌的发光值；

基于流式细胞分析法计算各实验样品及空白样品的细菌损失率；

根据所述细菌损失率计算各实验样品及空白样品校正后的发光细菌发光值；

根据校正后的发光细菌发光值计算校正后的发光值抑制率，对固体颗粒进行毒性评估。

2.根据权利要求1所述的利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，所述待测固体沉积物的预处理方法包括：以网筛去除杂质，风干，然后破碎至直径小于2mm，获得待测固体颗粒。

3.根据权利要求2所述的利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，所述实验样品的制备方法包括：将所述待测固体颗粒与3％氯化钠溶液按1:10(w/v)的比例混合均匀，然后以3％氯化钠溶液为溶剂稀释获得不同浓度的实验样品。

4.根据权利要求1所述的利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，所述流式细胞分析法包括以下步骤：

向各实验样品和空白样品中加入发光细菌后过滤得滤液；

将另一组实验样品和空白样品直接过滤得滤液；

向所得滤液中加入染料Syto13，至其浓度为5μmol/L，室温下黑暗处培养15min，然后使用流式细胞仪对染色的细菌细胞进行区分和计数。

5.根据权利要求4所述的利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，通过公式(1)计算所述细菌损失率：

R_损失＝[1-(C_实验1-C_实验0)/(C_空白1-C_空白0)]×100％ (1)

公式(1)中R_损失表示细菌损失率，C_实验1和C_空白1分别表示实验样品和空白样品加入发光细菌过滤所得滤液中细菌的数量，C_实验0和C_空白0分别表示实验样品和空白样品直接过滤所得滤液中细菌的数量。

6.根据权利要求1或5所述的利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，通过公式(2)计算所述校正后的发光细菌发光值：

L_校正＝L_测定×(1+R_损失) (2)

公式(2)中L_校正表示校正后的发光细菌发光值，L_测量表示测定的发光细菌的发光值，R_损失表示细菌损失率。

7.根据权利要求1所述的利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，通过公式(3)计算所述校正后的发光值抑制率：

R_校正＝(L_a-L_b)/L_a×100％ (3)

公式(3)中R_校正表示校正后的发光值抑制率，L_a表示空白样品校正后的发光细菌发光值，L_b表示实验样品校正后的发光细菌发光值。

8.根据权利要求1所述的利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，其特征在于，所述发光细菌包括费氏孤菌。