[发明专利]一种利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法

说明书

本发明公开了一种利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，包括以下步骤：采集待测固体沉积物，预处理后以溶剂稀释获得不同浓度的实验样品，以稀释所用的溶剂为空白样品；将发光细菌菌液加入到各实验样品和空白样品中，暴露15~20min后以滤膜过滤获取滤液，取相同体积的滤液置于水质快速毒性检测仪中，5min后测定发光细菌的发光值；基于流式细胞分析法计算各实验样品及空白样品的细菌损失率；根据细菌损失率计算各实验样品及空白样品校正后的发光细菌发光值；根据校正后的发光细菌发光值计算校正后的发光值抑制率，对固体颗粒进行毒性评估。本发明能够真实评估固体颗粒的毒性，结果准确可靠。

技术领域

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及一种利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法。

背景技术

发光细菌被用于环境污染检测，传统的发光细菌毒性实验将发光细菌暴露于待测物质后，检测发光细菌发光强度的变化，表征被检测物质的毒性。

目前固体物质的发光细菌毒性检测方法，通常先制备浸提液，即固体物质与浸提剂混合后的过滤液，然后用浸提液进行发光细菌毒性实验。如发明专利申请一种基于发光细菌法的土壤综合毒性检测方法(申请号为201710407732.6，公开号为CN107238599A)，包括以下步骤：对土壤样品进行预处理；称取土样，过尼龙筛后用甲醇索氏提取，减压旋转蒸发浓缩，加入乙二醇后将该混合物继续浓缩备用；取培养后的发光细菌培养液，加入样品浸提液、NaCl溶液和纯净水，混匀后静置，测定发光强度；样品毒性的表达：测量静置后混合液的发光抑制率、氯化汞当量浓度。该发明专利申请构建了一种土壤综合毒性检测的便捷方法，但是，其发光细菌的毒性基于浸提液，该方法实际反映的是固体物质中能够转向浸提剂的部分成分的毒性，而未检测与固体颗粒结合的且未转向浸提剂的成分的毒性，无法评估固体物质的真实毒性，使实验结果不准确。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，能够真实评估固体颗粒的毒性，结果准确可靠。

本发明提供了如下的技术方案：

一种利用发光细菌进行固体颗粒毒性评估的方法，包括以下步骤：

采集待测固体沉积物，预处理后以溶剂稀释获得不同浓度的实验样品，以稀释所用的溶剂为空白样品；

将发光细菌菌液加入到各实验样品和空白样品中，暴露15～20min，优选15min，以滤膜过滤获取滤液，取相同体积的滤液置于水质快速毒性检测仪中，5min后测定发光细菌的发光值；

基于流式细胞分析法计算各实验样品及空白样品的细菌损失率；

根据所述细菌损失率计算各实验样品及空白样品校正后的发光细菌发光值；

根据校正后的发光细菌发光值计算校正后的发光值抑制率，对固体颗粒进行毒性评估。

优选的，所述待测固体沉积物的预处理方法包括：以网筛去除杂质，风干，然后破碎至直径小于2mm，获得待测固体颗粒。

优选的，所述实验样品的制备方法包括：将所述待测固体颗粒与3％氯化钠溶液按1:10(w/v)的比例混合均匀，然后以3％氯化钠溶液为溶剂稀释获得不同浓度的实验样品。

优选的，所述流式细胞分析法包括以下步骤：

向各实验样品和空白样品中加入发光细菌后过滤得滤液；

将另一组实验样品和空白样品直接过滤得滤液；

向所得滤液中加入染料Syto13，至其浓度为5μmol/L，室温下黑暗处培养15min，然后使用流式细胞仪对染色的细菌细胞进行区分和计数。

优选的，通过公式(1)计算所述细菌损失率：