[发明专利]用于治疗受精障碍致女性原发不孕症的制剂及其使用方法

说明书

本发明属于基因治疗技术领域，具体为用于治疗受精障碍致女性原发不孕症的制剂及其使用方法。受精障碍患者临床表现为试管婴儿术中，卵子不能受精或受精率低或多精受精，无有效胚胎，因而试管婴儿反复失败。本发明提供的用于治疗受精障碍致女性原发不孕症的制剂由一定浓度WEE2 cRNA或WEE2蛋白质配制而成。然后，给患者的卵子注射上述制剂使患者卵子成功受精或显著提高受精率，并可获得有效胚胎及最终建立妊娠。

技术领域

本发明属于基因治疗技术领域，具体涉及治疗受精障碍致女性原发不孕症的制剂及其使用方法。

背景技术

正常受精是成功的人类生殖的关键环节。精子与卵子通过受精产生全能性合子，从而继续分化产生形成个体的所有细胞 （Clift, D., and Schuh, M. Nature reviewsMolecular cell biology. 2013. 14, 549-562）。因此，受精环节出现异常会导致女性不孕以及临床辅助生殖反复失败。临床中受精障碍主要包括受精率低、受精失败及多精受精。受精障碍是临床辅助生殖失败的重要原因之一。受精率低使得患者需多次取卵才可能得到极少数有效胚胎或尽管多次取卵，仍然无法获取有效胚胎。而受精失败与多精受精则使得患者完全无法获得胚胎。目前，仅一个基因突变被发现与受精失败有关（Alazami et al.TLE6 mutation causes the earliest known human embryonic lethality. Genomebiology 16, 240）。但是此基因突变仅能解释极少数受精失败患者，我们最近发现WEE2突变存在于多个受精障碍患者中（Qing Sang et al. Homozygous Mutations in WEE2CauseFertilization Failure and Female Infertility. Am J Hum Genet. 2018; 102（4）:649-657）。此外，目前辅助生殖临床中，针对受精障碍患者，并无任何方法可以改善及治疗。这些患者因而无法通过自身的精子及卵子获得后代。采用供卵或供精是这些患者的唯一路径。

基因治疗指通过分子生物学手段对相应基因进行补充、抑制、修复、编辑等操作，以改善及治疗相关遗传病。基因治疗方法已被用于多种疾病的治疗，包括血友病（Rangarajan S et al. AAV5-Factor VIII Gene Transfer in Severe Hemophilia A. NEngl J Med. 2017;377:2519-2530），脊肌萎缩症（Mendell JR et al. Single-DoseGene-Replacement Therapy for Spinal Muscular Astrophy. N Engl J Med. 2017;377:1713-1722），伯氏先天性黑内障（Bainbridge et al. Long-term Effect of GeneTherapy on Leber’s Congenital Amaurosis. N Engl J Med. 2015;372:1887-1897），高血脂症 （Fitzgerald K, et al. A Highly Durable RNAi Therapeutic Inhibitor ofPCSK9.N Engl J Med. 2017;376:41-51）等等。但是，目前尚无任何基因治疗应用于生殖疾病的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种效果优异、操作方便的用于治疗受精障碍致女性原发不孕症的制剂及其使用方法。

本发明研究发现，患者携带WEE2基因突变表现为不孕，辅助生殖临床中表现为卵子始终无法受精或受精卵率低及试管婴儿失败。本发明通过对相应患者卵子注射WEE2cRNA或WEE2蛋白，而后与精子受精，从而通过恢复突变卵子正常受精的能力，使得后续胚胎得以正常发育并形成有效胚胎及最终建立妊娠。

本发明中，WEE2 cRNA （cDNA）及WEE2蛋白的序列如SEQ ID NO.1，SEQ IDNO.2所示。