[发明专利]一种抑制性的合成Notch和双靶点系统及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201910628025.9 | 申请日： | 2019-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN110386987B | 公开（公告）日： | 2022-02-18 |
| 发明（设计）人： | 曾思敬 | 申请（专利权）人： | 深圳市思考者医疗信息咨询有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 深圳市顺天达专利商标代理有限公司 44217 | 代理人： | 吴静;高占元 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市福田区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抑制 合成 notch 双靶点 系统 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种双靶点系统，其特征在于，其包含有抑制性的合成Notch以及嵌合抗原受体；
所述合成Notch包含有Notch1序列与CSK激酶结合的融合蛋白；
所述抑制性的合成Notch还包含有与抗原靶点X相结合的scFv，与抗原靶点X相结合的scFv以及Notch1序列、CSK激酶依次连接；
所述抑制性的合成Notch还包含有CD8α信号肽，所述CD8α信号肽、与抗原靶点X相结合的scFv以及Notch1序列、CSK激酶依次连接；
所述Notch1序列具有负调节域和跨膜区，所述CD8α信号肽、与抗原靶点X相结合的scFv以及负调节域、跨膜区、CSK激酶依次连接；
所述抑制性的合成Notch和所述嵌合抗原受体通过P2A多肽连接；所述嵌合抗原受体包括依次连接的CD8α信号肽、与抗原靶点Y相结合的scFv以及CD8铰链区、CD28跨膜区、4-1BB、CD3ζ。
2.一种权利要求1所述的双靶点系统的制备方法，其特征在于，包括：
A、设计抑制性的合成Notch和所述嵌合抗原受体的双靶点系统，确定其结构元件和氨基酸序列；
B、合成双靶点系统的DNA序列，对编码氨基酸的密码子进行人源化优化，将基因序列连接至pWPT-GFP质粒载体，测序验证；
C、采用双靶点系统pWPT-GFP表达质粒、psPAX2和pMD2.G三质粒共转染293T细胞，包装慢病毒，48小时后收集含慢病毒的培养基上清，浓缩慢病毒；
D、慢病毒转导Jurkat T细胞，筛选和分离表达抑制性synNotch和CAR的双靶点系统的Jurkat T单克隆细胞株。
3.权利要求1所述的双靶点系统在用于制备改造免疫细胞并调节免疫细胞活性的药物、药物组合物、试剂和/或试剂盒中的应用。
4.权利要求1所述的双靶点系统在用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物、药物组合物、试剂和/或试剂盒中的应用。
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