[发明专利]一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法

权利要求书

1.一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：包括胶原蛋白原液提取、浓度配制、均质、除泡步骤。

2.根据权利要求1所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：所述胶原蛋白原液的提取步骤如下：

①牛跟腱解冻，去血水、表面异物和筋膜，用溶液进行一次预处理；

②步骤一处理的牛跟腱去脂肪膜，用溶液进行二次预处理；

③步骤二处理完的牛跟腱冷冻后切片，用溶液进行前处理；

④将前处理完的牛跟腱切片持续酶解，离心取上清制备胶原粗提液；

⑤调节胶原粗提液pH，加入中性盐盐析，离心获得胶原蛋白沉淀；

⑥加入磷酸盐缓冲液溶解上述沉淀，获得胶原蛋白原液。

3.根据权利要求1所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：所述浓度配制的步骤如下：

称取一定质量的胶原蛋白原液，调整浓度后获得胶原蛋白溶液；

搅拌胶原蛋白溶液至无颗粒,并调节pH至4.0～7.0之间。

4.根据权利要求3所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：

所述胶原蛋白溶液的质量浓度为6～20mg/ml。

5.根据权利要求3所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：胶原蛋白溶液调整步骤如下：

在胶原蛋白原液中加入一定体积的酸，通过分散器分散2～10min；

再次加入一定体积的酸，通过分散器分散1～10min。

6.根据权利要求3所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：胶原蛋白溶液搅拌步骤如下：

通过搅拌机搅拌10～180min。

7.根据权利要求3所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：调节胶原蛋白溶液pH步骤中，采用2％～20％氢氧化钠溶液、氢氧化钾或碳酸氢钠中的一种或几种。

8.根据权利要求5所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：所述酸为乙酸、柠檬酸、酒石酸或亚酒石酸。

9.根据权利要求1所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：均质步骤如下：

使用均质机、分散器或搅拌机使蛋白溶液均一。

10.根据权利要求1所述的一种基于胶原蛋白的软骨再生载体的制备方法，其特征是：除泡步骤如下：

将均质后的胶原蛋白溶液分装于离心杯中配平，1000～2500r/min离心5～35min。