[发明专利]一种用于CAPRI细胞的培养基组合物及其制备方法和应用在审

专利信息
申请号: 201910629513.1 申请日: 2019-07-12
公开(公告)号: CN110358730A 公开(公告)日: 2019-10-22
发明(设计)人: 古松海;吴茂友;蔡晓晴;赖春宁 申请(专利权)人: 赛德特生物科技开发有限公司
主分类号: C12N5/0783 分类号: C12N5/0783
代理公司: 北京三友知识产权代理有限公司 11127 代理人: 韩蕾;刘鑫
地址: 650100 云南省昆明市高新区茭菱*** 国省代码: 云南;53
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摘要:
搜索关键词: 细胞 培养基组合物 制备方法和应用 基础培养基 细胞培养周期 杀伤能力 培养基 冻存 可用 复苏 生产
【权利要求书】:

1.一种用于CAPRI细胞的培养基组合物,其组分包括:A液和B液;

其中,A液组成成分包括:基础培养基、IL-2、IFN-γ、GM-CSF;还可进一步包括IL-15、IL-18和IL-4中的一种或多种;

B液组成成分包括:基础培养基、IL-2、IFN-γ;还可进一步包括IL-15和/或IL-18。

2.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IL-2、IFN-γ、GM-CSF、IL-15、IL-18和IL-4在A液中的用量为:

IL-2:50-5000 IU/ml,IFN-γ:200-10000 IU/ml,GM-CSF:150-1500 IU/ml,IL-15:0-1000 IU/ml或200-1000 IU/ml,IL-18:0-5000 IU/ml或50-5000 IU/ml,IL-4:0-2000IU/ml或20-2000 IU/ml。

3.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IL-2、IFN-γ、IL-15和IL-18在B液中的用量为:

IL-2:100-5000 IU/ml,IFN-γ:200-10000 IU/ml,IL-15:0-10000 IU/ml或300-10000IU/ml,IL-18:0-2000 IU/ml或100-2000 IU/ml。

4.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,所述基础培养基为无血清细胞培养基或RPMI-1640培养基。

5.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IL-2在A液和B液中的用量分别为:500-2000 IU/ml、500-4000 IU/ml。

6.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IFN-γ在A液和B液中的用量分别为:2000-4000 IU/ml、2000-4000 IU/ml。

7.一种制备用于CAPRI细胞的培养基的方法,该方法包括:

以权利要求1~6任一项所述的培养基组合物分别制备A液与B液,其中,

A液制备:无菌操作,向基础培养基中加入IL-2、IFN-γ,搅拌5-10min,然后再加入GM-CSF、加或者不加IL-15、IL-18和IL-4中的一种或多种,继续搅拌5-10min;

B液制备:无菌操作,向基础培养基中加入IL-2、IFN-γ,搅拌5-10min,加或者不加IL-15和/或IL-18,继续搅拌5-10min;

将A液、B液分别调节pH值至7.0-7.2。

8.权利要求1~6任一项所述的培养基组合物在培养CAPRI细胞中的应用。

9.一种免疫细胞,其是采用权利要求1~6任一项所述的培养基组合物培养CAPRI细胞获得的。

10.根据权利要求9所述的免疫细胞,其中,通过流式细胞仪检测所述免疫细胞表面白细胞分化抗原,其具有以下性能:

CD3+/CD8+/CD4-细胞≥61.0%,CD3+/CD4+/CD8-细胞≤37.3%,CD4+/CD25+/FoxP3+细胞≤4.5%。

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