[发明专利]一种用于CAPRI细胞的培养基组合物及其制备方法和应用在审
申请号: | 201910629513.1 | 申请日: | 2019-07-12 |
公开(公告)号: | CN110358730A | 公开(公告)日: | 2019-10-22 |
发明(设计)人: | 古松海;吴茂友;蔡晓晴;赖春宁 | 申请(专利权)人: | 赛德特生物科技开发有限公司 |
主分类号: | C12N5/0783 | 分类号: | C12N5/0783 |
代理公司: | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人: | 韩蕾;刘鑫 |
地址: | 650100 云南省昆明市高新区茭菱*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 细胞 培养基组合物 制备方法和应用 基础培养基 细胞培养周期 杀伤能力 培养基 冻存 可用 复苏 生产 | ||
1.一种用于CAPRI细胞的培养基组合物,其组分包括:A液和B液;
其中,A液组成成分包括:基础培养基、IL-2、IFN-γ、GM-CSF;还可进一步包括IL-15、IL-18和IL-4中的一种或多种;
B液组成成分包括:基础培养基、IL-2、IFN-γ;还可进一步包括IL-15和/或IL-18。
2.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IL-2、IFN-γ、GM-CSF、IL-15、IL-18和IL-4在A液中的用量为:
IL-2:50-5000 IU/ml,IFN-γ:200-10000 IU/ml,GM-CSF:150-1500 IU/ml,IL-15:0-1000 IU/ml或200-1000 IU/ml,IL-18:0-5000 IU/ml或50-5000 IU/ml,IL-4:0-2000IU/ml或20-2000 IU/ml。
3.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IL-2、IFN-γ、IL-15和IL-18在B液中的用量为:
IL-2:100-5000 IU/ml,IFN-γ:200-10000 IU/ml,IL-15:0-10000 IU/ml或300-10000IU/ml,IL-18:0-2000 IU/ml或100-2000 IU/ml。
4.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,所述基础培养基为无血清细胞培养基或RPMI-1640培养基。
5.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IL-2在A液和B液中的用量分别为:500-2000 IU/ml、500-4000 IU/ml。
6.根据权利要求1所述的培养基组合物,其中,IFN-γ在A液和B液中的用量分别为:2000-4000 IU/ml、2000-4000 IU/ml。
7.一种制备用于CAPRI细胞的培养基的方法,该方法包括:
以权利要求1~6任一项所述的培养基组合物分别制备A液与B液,其中,
A液制备:无菌操作,向基础培养基中加入IL-2、IFN-γ,搅拌5-10min,然后再加入GM-CSF、加或者不加IL-15、IL-18和IL-4中的一种或多种,继续搅拌5-10min;
B液制备:无菌操作,向基础培养基中加入IL-2、IFN-γ,搅拌5-10min,加或者不加IL-15和/或IL-18,继续搅拌5-10min;
将A液、B液分别调节pH值至7.0-7.2。
8.权利要求1~6任一项所述的培养基组合物在培养CAPRI细胞中的应用。
9.一种免疫细胞,其是采用权利要求1~6任一项所述的培养基组合物培养CAPRI细胞获得的。
10.根据权利要求9所述的免疫细胞,其中,通过流式细胞仪检测所述免疫细胞表面白细胞分化抗原,其具有以下性能:
CD3+/CD8+/CD4-细胞≥61.0%,CD3+/CD4+/CD8-细胞≤37.3%,CD4+/CD25+/FoxP3+细胞≤4.5%。
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