[发明专利]一种用于CAPRI细胞的培养基组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种用于CAPRI细胞的培养基组合物及其制备方法和应用。本发明的用于CAPRI细胞的培养基组合物，其组分包括：A液和B液；其中，A液组成成分包括：基础培养基、IL‑2、IFN‑γ、GM‑CSF；还可进一步包括IL‑15、IL‑18和IL‑4中的一种或多种；B液组成成分包括：基础培养基、IL‑2、IFN‑γ；还可进一步包括IL‑15和/或IL‑18。本发明的培养基可用于CAPRI细胞的培养，可缩短CAPRI细胞培养周期，增加细胞数量，细胞成分中有更多的CD8+T细胞，更低的Treg调节细胞，生产出的CAPRI细胞的杀伤能力更强，冻存后复苏率更高。

技术领域

本发明是关于一种用于CAPRI细胞的培养基组合物及其制备方法和应用，属于细胞培养技术领域。

背景技术

免疫细胞治疗技术是采集人体免疫细胞，在多种免疫活性因子的作用下，经过体外培养，消除患者体内的免疫抑制因素，筛选并大量扩增免疫效应细胞，然后再回输到体内，杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞。免疫细胞治疗又称细胞免疫治疗或细胞过继免疫治疗，近年来发展迅速，被誉为继手术、化疗、放疗后第四种最有前景的肿瘤治疗方法，其临床研究在国外非常活跃，某些种类的免疫细胞治疗也已经获得临床应用。细胞治疗包括使用基因工程合成的肿瘤多肽诱导T淋巴细胞以对抗相应的肿瘤抗原、淋巴因子激活的杀伤细胞(简称LAK细胞)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、抗原呈递细胞(DC)，链式激活的免疫细胞(简称CAPRI细胞)等。在CAPRI之前，临床使用上以CIK为最多，但总的来说都还缺乏临床治疗的有力数据。针对之前多种细胞疗法存在的不足之处，德国慕尼黑大学医学院免疫研究所教授Rudolf Wank在CIK细胞疗法上进行了改进，发明了CAPRI细胞疗法，CAPRI细胞疗法全称Cascade Primed Immune cells，即链式激活的免疫细胞，又名链式CIK，这种细胞疗法克服了之前几种细胞疗法的诸多不足，其杀伤机理比CIK更加优越，临床疗效更加显著。经过在德国十多年的临床观察，该疗法可提高患者免疫力和抵抗力、提高生活质量、巩固和强化其他治疗效果、预防和延缓复发与转移、延长生存期。该技术的原理是应用肿瘤病人的外周血淋巴细胞，经活化刺激，获得对肿瘤的特异性杀伤功能，再回输到病人体内以杀伤肿瘤细胞。

同临床使用最多的CIK相比，CAPRI细胞疗法具有四大优势：(1)主要效应细胞为Th、CTL、NKT、NK、DC，对表达MHC的肿瘤细胞也有杀伤作用；(2)高效杀伤活力：可以连续使用7次而杀伤活性不减；(3)记忆细胞比重达到49％；(4)解决免疫逃逸：上调HLA表达。由于CAPRI细胞是经过诱导、激活的患者自身的细胞，因此，治疗相当安全，仅有少量病例(约6-8％的患者)在细胞回输后2-10小时注射局部出现红肿等轻度局部过敏症状，一般不需治疗，12小时内症状消失。在德国十多年的临床实践中并没有发现其他副作用。

CAPRI细胞培养如何实现快速扩增，同时细胞冻存后复苏率更高，杀伤率更高，其细胞培养是关键，然而现有技术培养CAPRI细胞时其增长速度慢，细胞冻存后复苏率不高，杀伤率不高。

发明内容

基于现有技术存在的CAPRI细胞的扩增效率差、杀伤活性低等缺陷，本发明的目的在于提供一种用于CAPRI细胞的培养基组合物。

本发明的另一目的在于提供所述的培养基的制备方法。

本发明的另一目的在于提供所述的培养基的应用。

本发明的另一目的在于提供所述的培养基培养CAPRI细胞获得的免疫细胞。

为实现上述目的，一方面，本发明提供了一种用于CAPRI细胞的培养基组合物，其组分包括：A液和B液；

其中，A液组成成分包括：基础培养基、IL-2(白介素-2)、IFN-γ(γ-干扰素)、GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)；还可进一步包括IL-15(白介素-15)、IL-18(白介素-18)和IL-4(白介素-4)中的一种或多种；