[发明专利]一种总蛋白提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种总蛋白提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括缓冲液I、缓冲液II、缓冲液III和助剂，其中，

所述缓冲液I在使用前需加入助剂，以对组织样本进行裂解。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液I包括Tris-HCl缓冲液、离液剂一、表面活性剂一、螯合剂一和还原剂一，

所述离液剂一为尿素和/或硫脲；

所述表面活性剂一包括离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂；

所述螯合剂一选自乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、1,10-二氮杂菲、柠檬酸和磷酸中的两种或多种；

所述还原剂一选自三丁基氧膦(TBP)、磷酸三氯乙酯(TCEP)、聚乙烯基聚吡咯烷酮、抗坏血酸中的两种。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述助剂包括磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、二流苏糖醇(DTT)和N-乙基马来酰亚胺。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸酶抑制剂选自氟化钠、钒酸钠或甘油-2-磷酸中的两种；

优选为氟化钠和甘油-2-磷酸。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液II包括Tris-HCl/PBS缓冲液、离液剂二、表面活性剂二、螯合剂二和还原剂二，其中，

所述离液剂二为尿素和/或硫脲；

所述表面活性剂二为SDS、辛基葡糖苷、十二烷基麦芽糖苷、Triton X-100和酰胺硫代甜菜碱中的一种；

所述螯合剂二选自乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、1,10-二氮杂菲、柠檬酸和磷酸中的一种；

所述还原剂二为2-巯基乙醇、DTT、二硫赤藓糖醇(DTE)中的一种。

6.一种总蛋白提取方法，优选采用权利要求1至5之一所述的试剂盒进行，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1，预处理蛋白提取样本与配置蛋白提取缓冲液，然后将蛋白提取缓冲液与蛋白提取样本混合；

步骤2，离心除去不溶物，沉淀杂质蛋白，然后再次离心，除去杂质；

步骤3，重复溶解、沉淀蛋白质；

步骤4，对步骤3中获得的蛋白质进行干燥，溶解，储存备用。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1中，所述蛋白提取缓冲液按照体积重量比为(1～5)：1加入到蛋白提取样本中。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述离心除去不溶物的操作在4℃下进行，离心速度为10000～20000g，离心时间为10～30min。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述沉淀杂质蛋白为将离心后除去不溶物的上清与丙酮、甲醇混合物混合，

所述丙酮与甲醇的体积比为(8～18)：1。

10.一种权利要求1至5之一所述的试剂盒在提取蛋白组学检测样本方面的用途。