[发明专利]一种总蛋白提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种总蛋白提取试剂盒及提取方法，所述试剂盒包括缓冲液I、缓冲液II、缓冲液III和助剂，所述缓冲液I在使用前需加入助剂，以对组织样本进行裂解。所述方法按照预处理蛋白提取样本与配置蛋白提取缓冲液，将蛋白提取缓冲液与蛋白提取样本混合；离心除去不溶物，沉淀杂质蛋白，然后再次离心，除去杂质；重复溶解、沉淀蛋白质；对得到的蛋白质进行干燥，溶解，储存备用的步骤进行。本发明所提供的总蛋白提取试剂盒，成分简单，成本低，适用范围广，所述方法操作简便，调节易控，提取效率高，质量好。

技术领域

本发明涉及蛋白质分析技术领域，具体涉及一种总蛋白提取试剂盒及提取方法。

背景技术

蛋白质组指基因组表达的所有相应蛋白质的集合，即细胞、组织或机体全部蛋白质的存在及其活动方式。相比基因组，蛋白质组是一个动态的概念，蛋白质组受到环境因素的影响而发生动态的改变。因此，通过检测蛋白质的蛋白种类变化，对细胞生理病理过程相关的分子机制研究，药物靶点的发现和疾病的诊断都有重要意义。液相色谱-质谱技术(LC-MS/MS)已被广泛用于大规模的蛋白组学，也是目前蛋白质组分析的主流技术。液相色谱-质谱技术通过提取细胞内全蛋白组并进行酶切，对产生的大量多肽片段进行液相色谱分析，然后经质谱进一步离子化和质荷比鉴定，通过生物信息手段对各多肽片段的质荷比进行计算得到其氨基酸组成，最终通过数据库检测比对后获得蛋白质的序列和种类信息。

急性胰腺炎涉及多种病理生理途径的变化，包括炎症、微循环功能障碍、细胞氧化应激反应、凋亡和坏死等，揭示胰腺炎早期的复杂蛋白质组变化能够为胰腺炎发病机制的研究提供新的帮助。

截至目前，胰腺炎相关的蛋白组学报道较少，且坚定蛋白数目极少，最新2018年的胰腺癌蛋白组学定量仅鉴定997种，远低于哺乳动物中定量蛋白组学平均约5000个蛋白质的鉴定数目。但是，液相色谱-质谱技术检测蛋白质组对样本的要求较高，样本提取的蛋白质质量会对鉴定的蛋白质组数目产生直接影响。目前传统的蛋白质组提取方法或试剂盒提取的总蛋白数量和种类少，蛋白易降解，质量差，均无法在以胰腺炎组织为样本的蛋白质组学应用中取得较好的效果。

因此，有必要提供一种总蛋白提取试剂盒及提取方法，其可以显著提高用于蛋白组学检测的总蛋白数量和质量，提高鉴定效率。

发明内容

为了克服上述问题，本发明人进行了锐意研究，设计出一种总蛋白提取试剂盒及提取方法，所述试剂盒通过设置不同浓度、组分的缓冲液，以及设定特定的提取条件，有助于在蛋白提取过程的裂解阶段、纯化阶段及沉淀阶段提高效率和提取质量，能够显著提高胰腺炎蛋白质组学中蛋白质的鉴定数目，从而完成了本发明。

具体来说，本发明的目的在于提供以下方面：

第一方面，提供了一种总蛋白提取试剂盒，其中，所述试剂盒包括缓冲液I、缓冲液II、缓冲液III和助剂，

所述缓冲液I在使用前需加入助剂，以对组织样本进行裂解。

第二方面，提供了一种总蛋白提取方法，优选采用第一方面所述的试剂盒进行，其中，所述方法包括以下步骤：

步骤1，预处理蛋白提取样本与配置蛋白提取缓冲液，然后将蛋白提取缓冲液与蛋白提取样本混合；

步骤2，离心除去不溶物，沉淀杂质蛋白，然后再次离心，除去杂质；

步骤3，重复溶解、沉淀蛋白质；

步骤4，对步骤3中获得的蛋白质进行干燥，溶解，储存备用。

第三方面，提供了一种第一方面所述试剂盒在提取蛋白组学检测样本方面的用途。

本发明所具有的有益效果包括：

(1)本发明所提供的总蛋白提取试剂盒，成分简单，成本低，适用范围广；