[发明专利]长期扩增粒细胞-巨噬细胞祖细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种扩增粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMP)群的方法，其包含：

在培养基中培养GMP，所述培养基包含：

(i)生长因子，

(ii)B-Raf激酶抑制剂，以及

(iii)Wnt激活剂和/或GSK-3抑制剂，

其中，所述GMP在经历多次细胞传代和/或克隆扩增后形态保持基本不变。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述GMP来源于干细胞或是从干细胞获得的。

3.根据权利要求2所述的方法，其中在培养之前或期间对所述干细胞进行遗传工程改造。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述干细胞是造血干细胞。

5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其中所述造血干细胞分离自受试者的骨髓。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物受试者。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述受试者是人、大鼠或小鼠。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基包含DMEM/F12和神经基础培养基。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述培养基包含比例为约5:1至约1:5的DMEM/F12和神经基础培养基。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述培养基包含比例为约1:1的DMEM/F12和神经基础培养基。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述培养基包含选自胰岛素、转铁蛋白、BSA组分V、腐胺、亚硒酸钠、DL-α生育酚和/或亚麻酸的一种或多种补充物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述培养基补充有胰岛素、转铁蛋白、BSA组分V、腐胺、亚硒酸钠、DL-α生育酚和亚麻酸。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述生长因子是干细胞因子(SCF)。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述B-Raf激酶抑制剂选自GDC-0879、PLX4032、GSK2118436、BMS-908662、LGX818、PLX3603、RAF265、RO5185426、威罗菲尼、PLX8394、SB590885以及它们的任意组合。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述B-Raf激酶抑制剂是GDC-0879。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Wnt激活剂选自SKL 2001、BML-284、WAY 262611、CAS 853220-52-7、QS11以及它们的任意组合。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Wnt激活剂是SKL 2001。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述GSK-3抑制剂选自CHIR99021、CHIR98014、SB216763、BIO、A1070722、AR-A014418以及它们的任意组合。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述GSK-3抑制剂是CHIR99021。

20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述GMP具有小、圆形的和/或非附着的均一形态。