[发明专利]长期扩增粒细胞-巨噬细胞祖细胞的方法及其应用

说明书

本公开提供了粒细胞‑巨噬细胞祖细胞，由其产生的粒细胞‑巨噬细胞祖细胞的长期扩增的方法，以及其粒细胞巨噬细胞祖细胞的用途。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年10月8日提交的序号为62/742,887，US的临时申请的优先权，其公开内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开提供了长期扩增粒细胞-巨噬细胞祖细胞的的方法、由此产生的粒细胞-巨噬细胞祖细胞以及粒细胞-巨噬细胞祖细胞的用途。

背景技术

粒细胞、巨噬细胞和树突细胞是人类先天免疫系统的重要组成部分。它们是抵御病原体的第一道防线，在维持我们身体的体内稳态和预防包括感染、代谢疾病和癌症的各种疾病方面发挥着核心作用。这些细胞来源于骨髓中的共同祖细胞，即粒细胞-巨噬细胞祖细胞(GMP)。

发明内容

本文提供了能够扩增粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMP)的方法，例如，GMP的长期扩增和克隆性扩增。这些方法通常适用于由任何数量的受试者来源(包括小鼠、大鼠、人等)来生成GMP的长期和克隆性扩增。在一些实施例中，通过本公开的方法生成的GMP的许多优点之一是GMP易受遗传修饰技术的影响，从而允许将GMP用于基础科学研究和临床治疗的应用。因此，扩增和遗传修饰了的GMP可以容易地转化为广泛的临床应用。例如，可以对人GMP进行遗传修饰，使它们分化成巨噬细胞(例如，敲除SIRPα和/或PI3Kγ基因)。这些工程化的巨噬细胞可能或预期具有增强的抗肿瘤作用，并且可以作为单一疗法或与其他免疫剂的组合疗法在临床上用于治疗癌症，诸如与抗-PD-1/PD-L1抗体和嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞联合。此外，离体扩增的人GMP可以容易地用于灌注或移植来治疗由于例如化疗、放疗等引起的中性粒细胞减少。这种离体扩增的GMP可以是自体的或者受试者同种异体的。

本公开提供了一种扩增粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMP)群的方法，其包含在培养基中培养GMP，所述培养基包含：(i)生长因子，(ii)B-Raf激酶抑制剂，以及(iii)Wnt激活剂和/或GSK-3抑制剂，其中，GMP在经历多次细胞传代和/或克隆扩增后形态基本上保持不变。在一个实施例中，GMP衍生自或者获自干细胞。在另一个实施例中，在培养之前或期间对干细胞进行基因工程改造。在又一个或另一个实施例中，干细胞是造血干细胞。在又一个或另一个实施例中，造血干细胞是从受试者的骨髓中分离的。在另一个实施例中，受试者是哺乳动物受试者。在又一个或另一个实施例中，受试者是人、大鼠或小鼠。在又一个或另一个实施例中，培养基包含DMEM/F12和神经基础培养基。在又一个或另一个实施例中，培养基包含比例为约5:1至约1:5的DMEM/F12和神经基础培养基。在又一个或另一个实施例中，培养基包含比例为约1:1的DMEM/F12和神经基础培养基。在又一个或另一个实施例中，培养基包含一种或多种补充物，补充物选自胰岛素、转铁蛋白、BSA组分V、腐胺、亚硒酸钠、DL-α生育酚和/或亚麻酸。在又一个或另一个实施例中，培养基补充有胰岛素、转铁蛋白、BSA组分V、腐胺、亚硒酸钠、DL-α生育酚以及亚麻酸。在又一个或另一个实施例中，生长因子是干细胞因子(SCF)。在又一个或另一个实施例中，B-Raf激酶抑制剂选自GDC-0879、PLX4032、GSK2118436、BMS-908662、LGX818、PLX3603、RAF265、RO5185426、威罗菲尼、PLX8394、SB590885以及它们的任何组合。在又一个或另一个实施例中，B-Raf激酶抑制剂是GDC-0879。在又一个或另一个实施例中，Wnt激活剂选自SKL 2001、BML-284、WAY 262611、CAS853220-52-7、QS11以及它们的任何组合。在又一个或另一个实施例中，Wnt激活剂是SKL2001。在任一个前述实施例的又一个实施例中，GSK-3抑制剂选自CHIR99021、CHIR98014、SB216763、BIO、A1070722、ARA014418以及它们的任何组合。在又一个或另一个实施例中，GSK-3抑制剂是CHIR99021。在又一个或另一个实施例中，GMP具有小、圆形和/或非附着的均一形态。