[发明专利]加德纳杆菌、白色念珠菌双重检测的引物、探针组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.加德纳杆菌、白色念珠菌双重检测的引物、探针组，其包括：

SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物对，SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针；和

SEQ ID NO:4～5所示核苷酸序列的引物对，SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针。

2.根据权利要求1所述的引物、探针组，其特征在于，

SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团CY5，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ3；

SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团FAM，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1。

3.加德纳杆菌、白色念珠菌双重检测的试剂盒，其包括权利要求1或2所述的引物、探针组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括对内参基因HBB检测的引物对和探针；

所述针对内参基因HBB检测的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:7～8所示；

所述针对内参基因HBB检测的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，SEQ ID NO:9所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团ROX，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ2。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括荧光定量PCR检测试剂和/或样本提取试剂；

所述荧光定量PCR检测试剂包括qPCR Master Mix酶混合液、qPCR Master Mix反应缓冲液；

所述样本提取试剂包括NaOH、TritonX-100和TE缓冲液。

7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照和/或阴性对照；

本发明的阴性对照品为DEPC水；

本发明的阳性对照品为含有加德纳杆菌和白色念珠菌靶基因片段的质粒溶液。

8.检测并区分加德纳杆菌和白色念珠菌的方法，其特征在于，包括：

以权利要求3～7任一项所述的试剂盒，对待测样品DNA进行实时荧光定量PCR检测，产生S型扩增曲线则为阳性。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的体系包括：

水补足至25μL。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的程序包括：

50℃ 2分钟；

95℃ 5分钟预变性；

95℃ 15秒→60℃35秒，45个循环。