[发明专利]靶向PD-L1微泡的制备方法及在制备抑制宫颈癌的药物上的应用

权利要求书

1.靶向PD-L1微泡在制备抑制宫颈癌移植瘤的药物上的应用，其特征在于，靶向PD-L1微泡的制备方法，包括如下步骤：

（1）二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸-聚乙酰亚胺混于玻璃试管中，50-60℃水浴锅预热后，涡旋状态下充入氮气使混合液成膜于试管壁；

（2）将步骤（1）中成膜后的玻璃管抽真空后，加入Tris缓冲液，水浴超声后置于西林瓶中密封，冲入C₃F₈气体，冷藏保存；

（3）将步骤（2）中冷藏后的西林瓶经振荡后得到白色乳状液体；将该白色乳状液体移经离心后弃去下层液体即为生物素化脂质微泡；

（4）向步骤（3）中生物素化脂质微泡中滴加链酶亲和素，在2-4℃、避光下恒温振荡孵育，得到微泡混悬液；

（5）将步骤（4）中的微泡混悬液离心后，弃去下清液后，采用PBS缓冲液漂洗、离心、弃下清，得到微泡；

（6）将生物素化的PD-L1抗体加入步骤（5）的微泡中，在2-4℃、避光的恒温振荡孵育过夜后离心，弃下清液，加入PBS缓冲液漂洗、离心、弃下清，即可得到靶向PD-L1微泡。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸—聚乙酰亚胺摩尔比75-90:3-6:3-6:2-6。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸—聚乙酰亚胺摩尔比85:5:5:5。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，链酶亲和素的加入量相对于生物素化脂质微泡的加入量过量；生物素化的PD-L1抗体的加入量相对于微泡的加入量过量。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的靶向PD-L1微泡在制备抑制U14宫颈癌细胞的药物上的应用。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的靶向PD-L1微泡的浓度为1×10⁷-1.5×10⁹个/ml。