[发明专利]一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法

权利要求书

1.一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，包括以下步骤：

1)选择外植体并消毒

取复色矾根叶片，清洗后流水冲洗1-2小时，先用酒精消毒15-3秒，再用次氯酸钠消毒8-12分钟，然后用无菌水冲洗4-5次，吸干水份待用；

2)诱导不定芽

剪取复色矾根叶片中不同颜色的叶片块，每个剪口离不同叶色的边界0.2cm以上，叶片正面向上平放于诱导培养基上，先暗培养15-30d，然后取出置于光照条件下培养，光照时间为12-16h/d，光照强度为1000-2000LX，培养温度22-26℃，培养40-65d后，外植体切口处形成不定芽；

所述诱导培养基包含：MS基本培养基，6-苄氨基嘌呤0.1-1.0mg/L，萘乙酸0.05-0.2mg/L，噻苯隆0.01-0.1mg/L，蔗糖30-45g/L，琼脂5-7g/L，pH 5.8-6.0；

3)增殖培养

将获得的不定芽按照不同叶色进行分类，切成单芽，分别培养于增殖培养基，培养30～35天，即可获得单纯色系的矾根丛生芽；

其中，所述增殖培养基中包括MS基本培养基、6-苄氨基嘌呤0.1-0.4mg/L、吲哚乙酸0.1-0.2mg/L、蔗糖25-35g/L和琼脂5-7g/L，pH 5.8-6.0；

培养条件：24-26℃，光照时间为12-16h/d，光照强度为1000-2000LX；

4)生根培养

将步骤3)获得的丛生芽切割为单芽，接种至生根培养基，培养25～30天，获得纯色矾根无菌苗；

培养条件：24-26℃，光照时间为12-16h/d，光照强度为1000-2000LX。

2.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，步骤1)中，步骤1外植体的取材在上午8时-10时完成，且取材前2-3天内无雨。

3.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，步骤1)中，剪切外植体时，保持外植体四周有伤口。

4.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，步骤1)中，所剪取的叶片块大小为(0.30-0.50)cm×(0.30-0.50)cm。

5.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，步骤2)中，所述诱导培养基包含：MS基本培养基，6-苄氨基嘌呤0.1-0.5mg/L，萘乙酸0.05-0.1mg/L，噻苯隆0.05-0.1mg/L，蔗糖30-35g/L，琼脂5-6g/L，pH 5.8-6.0。

6.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，步骤3)中，所述增殖培养基包含：MS基本培养基，6-苄氨基嘌呤0.2-0.4mg/L，吲哚乙酸0.1-0.2mg/L，蔗糖25-30g/L，琼脂5-6g/L，pH 5.8-6.0。

7.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，步骤4)中，所述生根培养基包含1/2MS基本培养基，吲哚丁酸0.1-0.5mg/L，萘乙酸0-0.1mg/L，蔗糖15-25g/L，琼脂5-7g/L，pH 5.8-6.0。

8.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，步骤2)、步骤3)和步骤4)中，所述光照条件的光照强度为1500LX-2000LX。

9.根据权利要求1所述分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，其特征在于，所述复色矾根叶片来自于矾根‘巴黎’组培苗突变体。