[发明专利]一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法

说明书

一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，包括以下步骤：选择外植体并消毒、诱导不定芽、增殖培养和生根培养，获得不同叶色的纯色矾根无菌苗。本发明基于组织培养方法，对矾根复色叶变异材料进行分离和培育，获得不同叶色的矾根无菌苗，解决了矾根复色叶变异材料无法繁殖后代或后代表现不稳定的问题，为矾根新品种培育提供了新途径。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法。

背景技术

矾根(Heuchera spp)又名珊瑚铃，虎耳草科矾根属彩叶花卉，喜阳耐阴又耐寒，叶色丰富，叶形多变，作为一种优良的彩叶阴生地被植物，矾根开发利用前景广阔，既是难得的观叶赏花的彩叶耐寒地被花卉，还可盆栽观赏。

由于大多数具有优良观赏价值的矾根品种因花粉不育等原因不结实，有少量能结实的品种出现播种后性状分离，不能保持优良的观赏特性的现象，矾根的该特性对其常规的杂交育种带来了一定的难度。

发明内容

本发明提供了一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，对矾根复色叶变异材料进行分离和培育，获得不同叶色的矾根无菌苗，解决了矾根复色叶变异材料无法繁殖后代或后代表现不稳定的问题，利用本发明对矾根进行规模化繁育，可在较短时间内获得大量性状一致的组培苗。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种分离矾根复色叶获得纯色无菌苗的方法，包括以下步骤：

1)选择外植体并消毒

取复色矾根叶片，清洗后流水冲洗1-2小时，先用酒精消毒15-30秒，再用次氯酸钠消毒8-12分钟，然后用无菌水冲洗4-5次，吸干水份待用；

2)诱导不定芽

剪取复色矾根叶片中不同颜色的叶片块，每个剪口离不同叶色的边界0.2cm以上，叶片正面向上平放于诱导培养基上，先暗培养15-30d，然后取出置于光照条件下培养，光照时间为12-16h/d，光照强度为1000-2000LX，培养温度22-26℃，培养40-65d后，外植体切口处形成不定芽；

所述诱导培养基包含：MS基本培养基，6-苄氨基嘌呤0.1-1.0mg/L，萘乙酸0.05-0.2mg/L，噻苯隆0.01-0.1mg/L，蔗糖30-45g/L，琼脂5-7g/L，pH 5.8-6.0；

3)增殖培养

将获得的不定芽按照不同叶色进行分类，切成单芽，分别培养于增殖培养基，培养30～35天，即可获得单纯色系的矾根丛生芽；其中，所述增殖培养基中包括MS基本培养基、6-苄氨基嘌呤0.1-0.4mg/L、吲哚乙酸0.1-0.2mg/L、蔗糖25-35g/L和琼脂5-7g/L，pH 5.8-6.0；培养条件：24-26℃，光照时间为12-16h/d，光照强度为1000-2000LX；

4)生根培养

将步骤3)获得的丛生芽切割为单芽，接种至生根培养基，培养25～30天，获得纯色矾根无菌苗；

培养条件：24-26℃，光照时间为12-16h/d，光照强度为1000-2000LX。

优选地，步骤1)中，步骤1外植体的取材在上午8时-10时完成，且取材前2-3天内无雨。

又，步骤1)中，剪切外植体时，保持外植体四周有伤口，步骤1)中，所剪取的叶片块大小为(0.30-0.50)cm×(0.30-0.50)cm。

优选地，步骤2)中，所述诱导培养基包含：MS基本培养基，6-苄氨基嘌呤0.1-0.5mg/L，萘乙酸0.05-0.1mg/L，噻苯隆0.05-0.1mg/L，蔗糖30-35g/L，琼脂5-6g/L，pH 5.8-6.0。