[发明专利]一种抗丙型肝炎病毒抗体

说明书

本发明提供一种抗HCV抗体或其抗原结合片段、其突变体、编码核酸、制备方法及应用。所述抗HCV抗体优选为全人源的，与其它动物源性(如鼠源性)的抗HCV抗体相比，因物种差异导致的免疫原性大大减少，且特异性好、亲和力高，如果用于临床将大大降低副作用。并且，发明人将上述抗体进行点突变，得到一系列与该抗体的灵敏度相似、相同甚至提高达约50％的突变体。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体涉及一种抗丙型肝炎病毒(HCV)抗体。

背景技术

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)，单股正链RNA病毒，属于黄病毒科丙型肝炎病毒属，被认定为非甲非乙型肝炎的主要致病病毒。HCV基因组编码十种病毒蛋白，包括核心蛋白、E1、E2三种结构蛋白，以及p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B七种非结构蛋白。在病毒包装过程中，非结构蛋白不会被包装至病毒粒子中，所以HCV病毒颗粒仅包含由核心蛋白和RNA组成的核衣壳，以及包膜蛋白E1、E2组成的病毒外壳。HCV包膜糖蛋白E1和E2所形成的异二聚体，是病毒与宿主细胞结合和侵入的关键结构，也是中和抗体作用的主要靶点。由于HCV RNA聚合酶的高效性与低校正性，在同一患者体内每天可产生约1012的病毒，所以也会存在大量的不同准种。根据基因组的异质性，HCV可分为7个基因型，100种亚种，世界主要流行的亚型为1a、1b、2a、2b、3a型，中国主要流行的亚型为1b、2a、3a、3b、6a型。该病毒主要经过血液和血液制品传播。HCV感染人体后，约80％的感染者会发展成慢性肝炎，10％-20％的感染者会发展成肝硬化、肝癌，全球有大概1亿7千万丙肝感染者，WHO估计全球以每年300-400万的速度增长，严重影响人类的健康。

目前HCV感染的治疗主要使用聚乙二醇干扰素联合利巴韦林(ribavirin，一种核苷类似物，干扰病毒基因组复制)的抗病毒方案，但治疗成本较高，副作用强。一直以来科研工作者在尝试分离对抗HCV感染者血清中包膜蛋白的抗体方面做出不懈的努力。

虽然病毒在不断产生变异，但是仍应该存在一些病毒无法改变或相当保守的位点，如其受体结合位点等，如果过度变异即可能导致病毒生命周期的终止。2001年AniaOwsianka首次发现HCV各亚型的包膜蛋白E2的N端(aa412-423)高度保守，该保守表位是与肝细胞表面CD81受体特异性结合。随后人们发现了与该表位特异性结合的具有广谱中和活性的抗体-AP33(鼠源)、3/11(鼠源)、HCV1(人源)、Hc33.1(人源)等，另外也有同时作用于CD81和SR-BI等其他受体结合位点而获得交叉中和能力的抗体，如鼠源单克隆抗体H77.39等。这类广谱中和抗体为疫苗的研究奠定了基础，具有重大现实意义。另外有研究显示，结合E2 aa412-426的人源多克隆抗体具有广谱中和活性，但是这一活性可被识别aa436-446表位的多克隆抗体所抑制。这些研究一方面证明了HCV广谱中和抗体的存在，另一方面也说明真正有效的广谱中和抗体，除能结合HCV保守区外，其作用还受更多包膜糖蛋白的抗原特性的影响。

最近有研究通过利用广谱中和抗体AR3C(Law M,Maruyama T,Lewis J,etal.Broadly neutralizing antibodies protect against hepatitis C virusquasispecies challenge[J].Nature medicine,2008,14(1):25.)对HCV E2蛋白的核心区域成功进行了结构解析。由于目前HCV中和抗体的筛选很大程度上得益于Env蛋白结构的明确，因此E2构象的获得将推动HCV的疫苗设计以及药物(抗体)的研发进程，但同时也提示进行相关抗体筛选工作的前沿性和紧迫性。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种抗HCV抗体或其抗原结合片段、其突变体、编码核酸、制备方法及应用等。

本发明第一方面提供一种抗体或其抗原结合片段，该抗体包含：选自由如SEQ IDNO：6、8和10所示的氨基酸序列组成的组中的一种或多种氨基酸序列。