[发明专利]检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症G6PD基因突变的引物、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了用于检测葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶缺乏症相关基因G6PD的热点突变的引物，包括扩增G6PD的c.1376,c.1388位点的引物；采用Sanger测序技术，可用于快速检测G6PD缺乏症患者体内c.1376,c.1388位点突变情况。利用本发明完成的检测结果准确，对G6PD缺乏症患者的快速诊断有重要的参考意义。

技术领域

本发明属于生命科学和生物技术领域，特别涉及检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症相关基因G6PD的c.1376,c.1388位点突变的引物、方法和试剂盒。

背景技术

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是人类最常见的红细胞酶病之一，全球超过4亿人患病。也是我国南方最常见的遗传性血液病，其实质是G6PD基因的突变。

G6PD是一种存在于人体红细胞内，参与调控人体内的氧化还原过程的一种酶，与人体最重要的还原性物质还原型辅酶Ⅱ的产生有关。还原型辅酶II为体内众多生化反应中的供氢体，保护细胞膜免受氧化损伤。若缺乏该酶，则可能在氧化诱导因素的作用下破坏红细胞膜，造成溶血性疾病的发生。G6PD缺乏症可导致新生儿溶血，并可由外源性氧化物诱导产生急性溶血性贫血，出现黄疸、精神不佳等症状。某些G6PD相关的基因突变可以引起慢性溶血，导致遗传性非球形红细胞贫血的发生。

G6PD缺乏症在临床上的表现有5种类型：慢性非球形细胞溶血性贫血、蚕豆病、药物性溶血、新生儿黄疸及某些感染性溶血。G6PD缺乏症易发生新生儿高胆红素血症的主要机理是红细胞过氧化损伤,另外还与红细胞寿命短、肝脏处理胆红素的能力下降有关。

目前己知G6PD基因位于X染色体长臂2区8带(Xq28)，基因长约18Kb，有13个外显子和12个内含子，由515个氨基酸组成。G6PD缺乏症的遗传方式呈x连锁不完全显性遗传。世界上已有200个以上的G6PD变异型被确定，在我国， Ganton(1376G→T)和Kaiping(1388G→A)是G6PD缺乏症的主要基因型。近年来，我国部分省市已把其作为优生优育的一环开始对育龄夫妇G6PD进行筛查。

研究G6PD基因突变与G6PD缺乏症的临床关系，可以有效准确的对患者的诊断和治疗提供有效的建议。该病的及早诊断和预防是我国优生优育工作的一个重要组成部分。本发明所述的方法可以及早检测是待检样本种否存在G6PD基因突变，从而判断其是否为G6PD缺乏症的患者或者携带者，给患者合理的建议，避免使用可能引起溶血的药物或食物，并能更有针对性地处理由此引起的新生儿高胆红素血症。

发明内容

本发明的目的在于提供检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症G6PD基因突变的引物，其特征在于，G6PD基因突变位点是c.1376,c.1388位点，所述引物包括：扩增G6PD的c.1376,c.1388位点的扩增引物G6PD-F、G6PD-R和测序引物M13F、 M13R，其碱基序列为：

G6PD-F:TGTAAAACGACGGCCAGTGCAGCCGTCGTCCTCTATG

G6PD-R:AACAGCTATGACCATGCACCTGCCATAAATATAGGGGAT

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13R：AACAGCTATGACCATG。

本发明的第二个目的是提供检测G6PD基因c.1376,c.1388位点突变情况的方法，包括以下步骤：

(1)抽提外周血或肌肉组织中的基因组DNA；

(2)利用扩增引物G6PD-F、G6PD-R对步骤(1)中提取的DNA进行扩增，获得扩增产物；

G6PD-F:TGTAAAACGACGGCCAGTGCAGCCGTCGTCCTCTATG