[发明专利]一种制备ADAMTSL-3/punctin-2多克隆抗体的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种制备ADAMTSL‑3/punctin‑2多克隆抗体的方法。本发明所述制备ADAMTSL‑3/punctin‑2多克隆抗体的方法通过选取合适的抗原多肽，合成多肽，与载体蛋白偶联后作为免疫原，进行动物免疫后收集抗血清，进而纯化获取抗体，克服大分子蛋白表达的难点。纯化利用获取的抗体用于免疫印迹、免疫染色和免疫沉淀实验，来辅助研究Punctin‑2在哺乳动物中枢神经系统的功能。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种制备ADAMTSL-3/punctin-2多克隆抗体的方法。

背景技术

Punctin蛋白是含有ADAMTS样(A Disintegrin-like and Metalloprotease withThrombospondin Type 1MotifSuperfamily-Like,ADAMTSL)结构域的细胞外基质蛋白之一，由于在细胞中表达后沉积呈点状(Punctate deposition)而得名Punctin。ADAMTS蛋白酶是一种分泌的锌离子金属蛋白。ADAMTSL蛋白与ADAMTS蛋白的辅助结构域相似但不具有蛋白酶活性。最近对ADAMTS蛋白的研究表明其辅助结构域具有调控、前肽修饰与糖基化等功能，ADAMTSL蛋白在可能在细胞外基质中行驶调控功能。ADAMTSL-3/Punctin-2(后简称Punctin-2)是一种分泌型的糖蛋白，主要位于细胞外基质(ECM)中，在人体的组织中广泛存在。目前市面上并没有可以有效检测Punctin-2的抗体。

多克隆抗体的制备通常对目的蛋白进行表达与纯化后作为抗原，连同佐剂通过静脉、腹腔、肌肉，皮内、皮下或淋巴结内注射进行免疫动物；经动物多次免疫后，收集动物的抗血清来获取抗体，再通过琼脂扩散试验或酶联免疫吸附试验进行抗体的效价质量评价。而目的蛋白经表达获取抗原与目的蛋白本身的大小有直接的联系，蛋白分子量较大的蛋白在进行表达比较困难，表达量通常较低或不易表达。

Punctin-2蛋白分子量大小约为180kDa，以Punctin-2的全长蛋白表达作为抗原比较困难，Punctin-2蛋白表达量较低，不利于Punctin-2多克隆抗体的制备。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的问题，提供一种制备ADAMTSL-3/punctin-2多克隆抗体的方法。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种制备ADAMTSL-3/punctin-2多克隆抗体的方法，小鼠Punctin-2多肽片段与载体蛋白偶联，偶联后的多肽免疫动物收集血清.

其中，所述小鼠Punctin-2多肽片段的氨基酸序列如cys-SEQ ID NO.1或SEQ IDNO.2所示。

作为优选，所述载体蛋白为血蓝蛋白、牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。更优选为血蓝蛋白。

在一些实施方案中，本发明所述的方法中，所述免疫的动物为新西兰大白兔。

作为优选，本发明所述的方法中，所述免疫方法为偶联后的多肽用1×PBS溶解后与等体积弗氏佐剂混合后分次免疫新西兰大白兔。

在一些具体实施例中，所述免疫新西兰大白兔每次免疫的时间、剂量及弗氏佐剂种类具体为