[发明专利]促卵泡生成素受体活性检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种促卵泡生成素受体活性检测试剂盒及其检测方法，其中，所述试剂盒包括两对扩增引物、多重PCR混合反应液，其中扩增引物用于扩增肥胖基因多态性位点，包括rs6165位点和rs6166位点，每对引物分别对应一个SNP位点的上下游区域。本发明采用促卵泡生成素受体活性检测试剂盒及其检测方法采用多重PCR的扩增方法，同时扩增与FSHR活性相关度高的两个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T_m值设计合理，扩增产物便于检测分离。一次扩增多条目的产物，不仅大大提高了扩增效率，降低了扩增成本。这种检测试剂盒可以扩展延伸到其他的SNP位点检测中，具有良好的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种促卵泡生成素受体活性检测试剂盒及其检测方法，属于检测试剂盒领域。

背景技术

女性在进入青春期后，卵巢在来自垂体的卵泡刺激素(FSH)作用下，发育卵子并排卵，卵泡刺激素受体(FSHR)与FSH结合后，激发颗粒细胞增殖与分化，分泌卵泡液使卵泡生长发育。FSHR失活突变对女性主要表现为高促性腺激素水平的原发性和继发性闭经、不孕，可伴有卵巢发育不良，FSHR激活突变主要导致女性在自然妊娠过程中容易发生卵巢过渡刺激综合症(OHSS)。目前HGMD(the Human Gene Mutation Database)记载的关于FSHR 的突变均为错义点突变，且只有13种，但根据临床病患的样本检测后发现，确有新突变产生。拟对新突变进行检测定性，确定其与卵泡发育受阻及其相关症状之间的原因，为临床提供一个新的FSHR的基因测序标准。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种促卵泡生成素受体活性检测试剂盒及其检测方法。

为实现上述发明目的，本发明采用的促卵泡生成素受体活性检测试剂盒及其检测方法的技术方案如下：

所述试剂盒包括两对扩增引物、多重PCR混合反应液，其中扩增引物用于扩增肥胖基因多态性位点，包括rs6165位点和rs6166位点，每对引物分别对应一个SNP位点的上下游区域。

优选的，所述rs6165位点的扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：1～2所示。

优选的，所述rs6166位点的扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：3～4所示。

优选的，所述多重PCR混合反应液包括DNA聚合酶、Mg²⁺和dNTPs。更进一步优选的，多重PCR混合反应液中还包括PCR稳定剂和增强剂。

优选的，所述扩增体系中，每个SNP位点的扩增引物和模板的加入量相同。

本发明中的检测试剂盒一般采用处理过的DNA样品作为扩增模板，样品一般来源于人全血或组织，处理样品可以减少血液中的免疫球蛋白G、血红蛋白和乳铁蛋白对PCR反应体系的干扰。

优选的，所述检测试剂盒还包括全血样品PCR缓冲液，所述缓冲液含有100mmol/LTris-HCl，50mmol/L KCl，pH 9.3～9.5。全血样品PCR缓冲液是本发明的一种优选的实施方案，其他类型的全血PCR试剂均可以采用，不限于本发明中的缓冲液和缓冲液配方。

优选的，试剂盒扩增体系为50μL的PCR体系，体系中同时含有rs6165位点和rs6166位点的扩增引物。

所述扩增体系具体为：

2×Platinum Multiplex PCR Master Mix 25μL；

模板2μL；

rs6165、rs6166上下游引物(10μmol/L)各1μL；无菌双蒸水补齐至50μL。