[发明专利]一种用于重楼资源遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合和分析方法

权利要求书

1.一种用于重楼遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合，其特征在于，包括以下7对引物：

me2-em10引物对，所述me2-em10引物对的正向引物me2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物em10的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

me3-em5引物对，所述me3-em5引物对的正向引物me3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物em5的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

me3-em7引物对，所述me3-em7引物对的正向引物me3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3，反向引物em7的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；

me3-em9引物对，所述me3-em9引物对的正向引物me3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物em9的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；

me3-em10引物对，所述me3-em10引物对的正向引物me3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物em10的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

me4-em1引物对，所述me4-em1引物对的正向引物me4的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，反向引物em1的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

me4-em4引物对，所述me4-em4引物对的正向引物me4的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，反向引物em4的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。

2.一种利用SRAP分子标记引物组合分析重楼遗传多样性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分别提取不同重楼样品的基因组总DNA，用权利要求1所述的SRAP分子标记引物组合分别进行PCR扩增，分别得到PCR扩增产物；

(2)将所述步骤(1)分别得到的PCR扩增产物分别进行凝胶电泳、成像后，分别得到谱带信息；

(3)根据所述步骤(2)分别得到的谱带信息对不同的重楼样品进行聚类及主坐标分析，并进行各遗传多样性参数的统计。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中PCR扩增的反应体系为，每25μl反应体系中含有不含Mg2+的10×PCRbuffer 3.0μl、Mg2+1.5mmol/L、模板DNA40ng、dNTPs 0.25mmol/L、引物对0.4μmol/L、Taq酶1U，ddH2O补足至25μl。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，35℃退火1min，72℃延伸1min，5个循环；94℃变性1min，50℃退火1min，72℃延伸90s，35个循环；最后72℃延伸7min，4℃保存。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，对所述步骤(2)得到的谱带信息进行矩阵分析。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述矩阵分析的方法包括：将电泳图谱上同一位置有条带出现的记为1，同一位置没有条带出现的记为0，由此生成0和1矩阵。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中对不同的重楼样品进行聚类及主坐标分析的方法包括：利用NTSYS2.10软件中SimQual程序计算相似系数矩阵，以Clustering程序中SHAN进行UPGMA聚类；用Three plot模块生成聚类图，构建分子进化树；根据计算的相似系数矩阵进行Decenter数据转换，进而进行主坐标分析。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，对所述步骤(3)中进行各遗传多样性参数的统计的方法包括：利用POPGENE1.32软件对重楼样品进行遗传多样性参数计算；所述参数包括：有效等位基因数、等位基因数、Shannon's信息指数、基因多样性指数遗传多样性参数，居群内基因多样性Hs、居群总基因多样度Ht、居群间遗传分化系数和基因流遗传分化指标。