[发明专利]一种用于重楼资源遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合和分析方法

说明书

本发明提供了一种用于重楼资源遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合和分析方法，涉及分子生物学DNA标记技术与应用技术领域。本发明所述用于重楼遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合，包括以下7对引物：me2‑em10、me3‑em5、me3‑em7、me3‑em9、me3‑em10、me4‑em1和me4‑em4。利用本发明提供的方法能够加快重楼资源的鉴定速度，缩短试验时间，结果稳定可靠，弥补了传统形态学鉴定方法实验误差较大的不足。

技术领域

本发明涉及分子生物学DNA标记技术与应用技术领域，具体涉及一种用于重楼资源遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合和分析方法。

背景技术

重楼(Paris polyphylla)，为百合科(Liliaceae)重楼属(Paris L.)多年生草本植物，多生于海拔600～3600米的林下阴湿处、沟谷边或草丛中。其性微寒、味苦，有小毒，以根茎入药，具有消肿止痛、清热解毒、定惊凉肝等功效。其主要化学成分甾体皂苷类，具有抑菌、消炎、抗肿瘤、止血、镇静、镇痛等生物活性。此外，重楼还是我国著名中成药云南白药、宫血宁胶囊、总皂苷片、热毒清、季德胜蛇药片等的主要原料。中国药典以滇重楼和华重楼的根茎作为重楼入药，其药用价值较高。民间实际将有粗壮根茎的大多数重楼属植物一并采挖出售，由于长期人为采挖，资源的消耗逐年递增，重楼野生资源濒临枯竭。重楼生长特性造成了其生长周期长，资源更新较慢。在这种供不应求的市场环境下，重楼资源遭到过度采摘，野生种植资源遭到不同程度破坏，甚至濒临灭绝。因此，急需对重楼资源遗传多样性进行分析，以期为我国特别是贫困山区重楼属生物多样性保护和利用研究提供依据。

分子标记是一种以DNA序列差异性为标记的检测遗传多样性的方法，具有不受外界环境及基因表达与否的影响，不影响实验材料的性状、可标记数量大及分辨率高等特点，目前被广泛应用于生物遗传研究。SRAP(相关序列扩增多态性，Sequence—relatedAmplified Polymorphism)是由美国加州大学的Li和Quiros于2001年在芸薹属作物中开发出来的一种基于PCR的分子标记。该标记通过独特的双引物设计对基因的ORFs(开放式阅读框)的特定区域进行扩增，上游引物对外显子进行特异性扩增，下游引物对内含子、启动子区域进行特异扩增。因个体不同及物种的内含子、启动子与间隔区长度不同等而产生多态性。该标记具有经济、操作简便、多态性高、稳定性好等特点，目前已在小麦、水稻、拟南芥、棉花、马铃薯等多种植物中得到应用，但应用于重楼属尚未有报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于重楼遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合和分析方法。利用本发明提供的方法能够加快重楼资源的鉴定速度，缩短试验时间，结果稳定可靠，弥补了传统形态学鉴定方法实验误差较大的不足。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于重楼遗传多样性分析的SRAP分子标记引物组合，包括以下7对引物：

me2-em10引物对，所述me2-em10引物对的正向引物me2的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，反向引物em10的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

me3-em5引物对，所述me3-em5引物对的正向引物me3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物em5的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

me3-em7引物对，所述me3-em7引物对的正向引物me3的核苷酸序列如SEQ IDNO.3，反向引物em7的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；

me3-em9引物对，所述me3-em9引物对的正向引物me3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物em9的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；