[发明专利]一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物及其应用

权利要求书

1.一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物，其特征在于，包括多潜能细胞活性物、富血小板血浆裂解液、滑膜间充质干细胞、盐酸法舒地尔，所述多潜能细胞与所述滑膜间充质干细胞的比例为1∶0.5-3，所述的滑膜间充质干细胞为原代培养的第2到5代细胞；所述的多潜能细胞活性物与富血小板血浆裂解液按照体积比1∶5～10；盐酸法舒地尔在药物中的浓度为15～30μmol/L。

2.根据权利要求1所述的一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物，其特征在于，所述滑膜间充质干细胞来源于人、大鼠或猪。

3.根据权利要求1所述的一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物，其特征在于，所述的多潜能细胞活性物的提取方法，包括以下步骤：

(1)外周血加入消化液，37℃恒温摇床培养，用含体积分数10％胎牛血清的M199培养基终止消化；

(2)收集消化液，离心收集沉淀物，以生理盐水重悬细胞，得到复合外周血干细胞；

(3)应用磁珠标记的Dlk抗体和Scal抗体，以磁珠筛选法从复合外周血干细胞中筛选出CD34^+/CD90^+外周血干细胞；

(4)将分选获取的CD34^+/CD90^+外周血干细胞接种于培养瓶中，加入干细胞培养基，在饱和湿度、体积分数5％CO₂、37℃环境下恒温培养，待细胞长到80％～90％融合后，用不含EDTA的0.25wt％胰酶消化传代；

(5)将传代细胞移入新的培养瓶中重复培养；收集细胞上清液，1000r/min离心，收集上清，继续以9000r/min离心，收集沉淀物，以生理盐水重悬，得到多潜能细胞活性物。

4.根据权利要求3所述的一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物，其特征在于，所述的消化液添加有PMSF蛋白酶抑制剂的I型胶原酶、II型胶原酶、生理盐水；配置方法为：质量浓度为0.05％～0.15％的I型胶原酶与0.05％～0.15％的II型胶原酶的生理盐水溶液，加入消化液总质量1％的PMSF蛋白酶抑制剂，最后调节溶液的pH值为7.2～7.4。

5.根据权利要求3所述的一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物，其特征在于，所得摇床培养条件为，摇床的转速为100～200r/min，培养30～50min。

6.根据权利要求3所述的一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物，其特征在于，所述的干细胞培养基，包括含体积分数5～10％胎牛血清的M199培养基，加入生长因子、抗生素；所述的生长因子包括谷氨酰胺、谷丙酸钠和Endogro细胞因子，抗生素为青链霉素。

7.根据权利要求6所述的一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物，其特征在于，所述的干细胞培养基中的谷氨酰胺浓度为100～150mmol/L，谷丙酸钠的浓度为6～10mmol/L，Endogro细胞因子的浓度为5～8μmol/L，所述青链霉素的浓度为100IU/mL。

8.根据权利要求1所述的一种外周血多潜能细胞活性物联合富血小板血浆制备用于半月板损伤治疗的药物的应用，其特征在于，用于治疗半月板损伤。