[发明专利]一种检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤后的长链非编码RNA及其引物和试剂盒

权利要求书

1.一种长链非编码RNA在制备检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的分子标志物的用途，其特征在于：所述长链非编码RNA为ENST00000542697，所述ENST00000542697的核酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的长链非编码RNA在制备检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的分子标志物的用途，其特征在于：用于检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的长链非编码RNA表达水平的特异性引物对如下：上游引物核苷酸序列为：5'-AAATGGGCTAACACTGAAAGAACC-3'，下游引物核苷酸序列为：5'-CCTGCCGAGGCTTGGATTAC-3'。

3.如权利要求2中所述的引物对在制备检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的试剂盒的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述试剂盒还包括内参基因β-actine的引物和探针序列、ENST00000542697的探针序列；

内参基因β-actine的上游引物序列：5’-CATCCTCACCCTGAAGTA-3’，

内参基因β-actine的下游引物序列：5’-AGGTCTCAAACATGATCTG-3’，

内参基因β-actine的探针序列：5’-ACGGCATCGTCACCAACTGG-3’，HEX荧光基团，BHQ淬灭基团；

ENST00000542697的探针序列：

5'-TGCAGAATCTCAGCAACGTCACAGAGG-3'，FAM荧光基团，BHQ淬灭基团。

5.根据权利要求3或4所述的用途，其特征在于：其试剂盒中还包括反转录所需试剂：反转录缓冲液、dNTP混合液、RNA酶蛋白质抑制剂、反转录酶和无核酸酶纯水。

6.根据权利要求3或4所述的用途，其特征在于：其试剂盒还包括微滴式数字PCR所需的下列试剂：微滴式数字PCR预混液，无核酸酶纯水，微滴分析专用油，微滴发生专用油。

7.根据权利要求1所述的长链非编码RNA在制备检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的分子标志物的用途，其特征在于：所述多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的分子标志物的检测方法的具体步骤如下：

(1)收集多环芳烃暴露人群及对照人群的静脉血，分离血浆，进行芯片扫描；

(2)以步骤(1)中血浆进行提取总RNA，以总RNA为扩增模板逆转成cDNA，采用引物，然后基于微滴式数字PCR扩增LncRNA ENST00000542697与β-actine；

(3)读取和分析步骤(2)中微滴式数字PCR反应扩增结果，得到LncRNAENST00000542697与β-actine的拷贝数，得到非编码RNA分子标志物的表达水平。

8.根据权利要求7所述的长链非编码RNA在制备检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的分子标志物的用途，其特征在于：所述步骤(2)中血浆总RNA采用血浆miRNA提取试剂盒进行提取。

9.根据权利要求7所述的长链非编码RNA在制备检测多环芳烃暴露人群氧化应激损伤的分子标志物的用途，其特征在于：步骤(2)中逆转录的反应体系如下：总RNA 12uL，5x缓冲液4uL，RNA酶20U/uL抑制剂1uL，10mM dNTP 2uL，200U/uL逆转录酶1uL，共20uL体系，混匀后，逆转录反应程序如下：25℃，5min；42℃，6min；70℃，5min；

步骤(2)中微滴式数字PCR的反应体系如下：2×PCR预混液10μL、LncRNAENST00000542697上游引物：5'-AAATGGGCTAACACTGAAAGAACC-3', 浓度20μmol/μL 1μL、LncRNA ENST00000542697下游引物：5'-CCTGCCGAGGCTTGGATTAC-3'，浓度20μmol/μL 1μL、LncRNA ENST00000542697探针：5'-TGCAGAATCTCAGCAACGTCACAGAGG-3'，20μmol/μL 0.5μLFAM、β-actine上游引物：5’-CATCCTCACCCTGAAGTA-3’，20μmol/μL 1μL、β-actine下游引物：5’-AGGTCTCAAACATGATCTG-3’，浓度20μmol/μL 1μL、β-actine探针：5’-ACGGCATCGTCACCAACTGG-3’，20μmol/μL 0.5μL HEX、扩增模板3μL，补水至20μL，微滴式数字PCR的反应程序如下：A)预变性：95℃，10min；B)40个循环：95℃，15s；60℃，1min。