[发明专利]热带假丝酵母菌突变株及其在BCAA制备中的应用

说明书

热带假丝酵母菌突变株及其在BCAA制备中的应用，所述的热带假丝酵母菌突变株保藏编号为CGMCC No.17928。该酵母菌能特异性地除掉L‑Ala、L‑Glu，而且在L‑Ala和L‑Glu存在时不利用L‑Ile、L‑Val和L‑Leu。将酵母接入BCAA发酵液中培养，滤液通过脱色、除盐、浓缩结晶、烘干后得到高纯度BCAA产品，产品收率达到85％以上。通过简单的共培养过程，既去除杂酸，又不影响目标氨基酸的得率，且突变株菌体能够重复利用。整个工艺过程环保、易控制，有效地简化分离纯化和精制工艺，产品纯度高且收率高，产品可直接用于下游产品制备，适合大规模工业化应用。

背景技术

L-亮氨酸(L-Leu)、L-缬氨酸(L-Val)与L-异亮氨酸(L-Ile)同属于支链氨基酸，在食品、保健品、饲料等方面也有广泛的应用。在运动营养方面，支链氨基酸有助于促进训练后的肌肉恢复，特别适合健美人群和运动员作为膳食补充剂使用。

发酵法生产支链氨基酸的过程中往往采用离子交换法和多步结晶方法等去除杂酸，由于杂酸和产物的理化性质相似，从而影响纯化和精制的收率，其中难以去除的杂酸中L-丙氨酸(L-Ala)占比较大。专利CN201510744314.7采用离子交换柱分离L-缬氨酸和杂质氨基酸，L-缬氨酸提取收率在68％左右，且生产废水较大。

市场上支链氨基酸(BCAA)产品的类型主要为干混类、颗粒类、速溶类等，通常采用三种氨基酸原料按照不同比例和不同工艺进行制备。目前支链氨基酸发酵液中经常或多或少存在其他两种支链氨基酸，既然产品是三种氨基酸混合使用，因此在产品分离提取过程中只需要除掉支链氨基酸以外的杂酸，既减少生产废水，又提高产品收率。为了简化目标氨基酸的分离纯化和精制工艺，专利CN200910047124.4采用多种酶联合催化法去除反应体系中的丙氨酸和某些手性氨基酸，但从结果上来看并不能完全去除L-丙氨酸，且酶无法回收再利用。

从技术现状来看，高纯度支链氨基酸(BCAA)的制备工艺中，产物提纯分离技术需要进一步精进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以特异性消除生产体系中的游离L-丙氨酸(L-Ala)、L-谷氨酸(L-Glu)的方法，从而提高支链氨基酸纯度。

首先，本发明提供一株热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)突变株IBEC-16，保藏于中国北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.17928，保藏日期为2019年06月16日。

本发明的上述突变株是以热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)(CICC编号1253)为出发菌株，通过诱变筛选得到的。该突变菌能特异性地除掉发酵体系中的游离氨基酸L-Ala和L-Glu，而且在L-Ala和L-Glu存在时不利用L-Ile、L-Val和L-Leu。

基于该突变株IBEC-16的上述特征，本发明的另一目的在于提供一种高纯度支链氨基酸(BCAA)的生产方法，包括对发酵生产BCAA的发酵产物体系(即BCAA发酵液)进行后处理的步骤，所述的后处理包括将上述本发明的热带假丝酵母菌突变株菌体接种入BCAA发酵液中进行培养的除杂酸的步骤。

本发明提供了一株热带假丝酵母突变株及利用其制备高纯度BCAA产品的方法。以热带假丝酵母(CICC编号1253)为出发菌株，采用紫外诱变并驯化筛选得到一株热带假丝酵母突变株IBEC-16，该酵母菌能特异性地除掉L-Ala、L-Glu，而且在L-Ala和L-Glu存在时不利用L-Ile、L-Val和L-Leu。将酵母接入BCAA发酵液中培养，滤液通过脱色、除盐、浓缩结晶、烘干后得到BCAA产品，产品收率达到85％以上。通过简单的培养过程，既去除杂酸，又不影响目标氨基酸的得率，且突变株菌体能够重复利用。整个工艺过程环保、易控制，有效地简化分离纯化和精制工艺，产品纯度高且收率高，产品可直接用于下游产品制备，适合大规模工业化应用。

附图说明

本发明附图4幅: